【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术和病毒学，具体涉及一种鸡细小病毒的单克隆抗体以及所述单克隆抗体的应用，尤其是应用到鸡细小病毒vp2蛋白的检测，还可以应用于鸡细小病毒vp2蛋白的相关基础研究。
技术介绍
1、禽类细小病毒均属于细小病毒科细小病毒亚科，细小病毒亚科有8个属，其中的禽腺联病毒(avian adeno-associated virus,aaav)、鹅细小病毒(goose parvovirus,gpv)、番鸭细小病毒(muscovy duck parvovirus,mdpv)等禽类细小病毒属于依赖病毒属(dependovirus)，而鸡细小病毒(chicken parvovirus,chpv)属于细小病毒属(aveparvovirus)，chpv是引起鸡发育迟缓综合征(runting-stunting syndrome,rss)的主要病原体之一，又被称为吸收不良综合征(malabsorption syndrome,mas)，主要导致雏鸡的腹泻、发育迟缓和死亡率上升。1984年，鸡细小病毒(chpv)在美国被首次发现。1987年，伍荻滕在中国的鸡群中发现了chpv，且感染chpv的雏鸡出现严重的生长停滞。近年来在我国山东、河南、河北和广西等地均检测出chpv感染。2014年至2019年，对广西的肉鸡进行chpv的检测，发现1-7周龄肉鸡的chpv检出率高达74.46％，8-20周龄的肉鸡检出率为53.56％，说明chpv在鸡群中呈现普遍感染性，健康鸡中也能检测到该病毒的存在，由于目前缺乏chpv商品化疫苗，会对养鸡业造成重大的或潜在的
2、chpv基因组大小约5kb左右，含有三个开放阅读框(orf)，分别编码4种蛋白。orf1和orf3分别编码非结构蛋白ns1和np1，orf2编码结构蛋白vp1和vp2。在小鼠细小病毒、鹅细小病毒和猪细小病毒中，vp2蛋白由537个氨基酸组成，是chpv最主要的衣壳蛋白，在没有vp1的情况下也可以自组装成类似天然的衣壳。vp2蛋白与病毒粒子的组装、病毒的致病性和宿主细胞的趋向性相关。此外，vp2蛋白是病毒的主要保护性抗原，具有较强的免疫原性，机体受到该蛋白刺激会产生强烈的免疫应答，猪细小病毒和犬细小病毒的vp2蛋白等常被用于血清学诊断和疫苗制备。
3、由于chpv复制方式上具有独特性，在鸡胚和细胞中难以正常增殖，进一步加大该病毒免疫诊断的难度，因此目前多采用分子生物学方法检测，包括pcr、巢式pcr和染料法定量pcr检测等相关核酸检测方法，但是核酸提取和pcr要求有特殊仪器，并且对检测人员要求较高，不适合现场快速检测。目前还缺少对chpv抗原等的血清学检测方法，同时对chpv的vp2蛋白与宿主细胞相互作用的功能性研究还相对不足，其主要原因多在于缺少vp2蛋白的特异性抗体检测工具。
4、由于chpv分离十分困难，国外研究显示通过鸡胚接种可进行病毒分离，专利技术人采用国外报道的分离方式进行了多次尝试，但仍然未分离出该病毒。为了加强对chpv的致病机制及病毒蛋白相关功能的研究，专利技术人前期建立了chpv的感染性克隆株，作为研究病毒致病机制、蛋白功能的重要手段，并为本申请筛选病毒蛋白单克隆抗体提供了有利条件。专利技术人也曾以多克隆抗体作为捕获抗体，以单克隆抗体作为检测抗体，结果以失败告终。在此基础上，本专利技术运用单克隆抗体制备技术意外筛选得到了1株chpv的vp2蛋白单克隆抗体，并基于该单克隆抗体建立一种灵敏度、特异性相对更高的双抗夹心elisa检测平台，不仅为chpv的血清学检测、vp2蛋白的特异性检测、以及vp2蛋白的功能等基础研究提供了物质基础，同时可以为chpv在养鸡业的防控工作提供了相关的技术支撑。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于至少部分地克服现有技术的不足，提供了一种识别鸡细小病毒的单克隆抗体。
2、为达到上述目的或目的之一，本专利技术提供了如下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了一种单克隆抗体或其抗原结合片段，为抗鸡细小病毒vp2蛋白的单克隆抗体3f8或其抗原结合片段；能够分泌产生单克隆抗体3f8的杂交瘤细胞株3f8hybridoma cell line 3f8，已于2023年9月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号是cctcc no:c2023272，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。
4、优选地，所述的单克隆抗体或其抗原结合片段中，该单克隆抗体3f8或其抗原结合片段的轻链为kappa链；和/或，该单克隆抗体3f8或其抗原结合片段的重链为igg2a亚型。
5、优选地，所述的单克隆抗体或其抗原结合片段中，单克隆抗体3f8或其抗原结合片段能够特异性结合鸡细小病毒、包含鸡细小病毒的感染性克隆株、或其抗原结合部位。
6、第二方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，能够产生单克隆抗体3f8或其抗原结合片段。
7、第三方面，本专利技术提供了一种制备方法，用于制备单克隆抗体3f8或其抗原结合片段，和/或，用于制备单克隆抗体3f8或其抗原结合片段，包括以下步骤：1)在合适的条件下用纯化的鸡细小病毒vp2蛋白免疫小鼠；2)采用脾细胞与骨髓瘤细胞的细胞融合方法，制备并筛选单克隆的阳性杂交瘤细胞株；3)由所述阳性杂交瘤细胞株扩大制备对应的单克隆抗体；4)通过间接elisa方法验证所述单克隆抗体的特异性。
8、第四方面，本专利技术提供了一种用于检测鸡细小病毒的试剂盒，包括：单克隆抗体3f8或其抗原结合片段，和/或，单克隆抗体3f8或其抗原结合片段。
9、优选地，所述用于检测鸡细小病毒的试剂盒中，采用双抗体夹心elisa方法，以单克隆抗体3f8或其抗原结合片段、或单克隆抗体3f8或其抗原结合片段为捕获抗体，以鸡抗鸡细小病毒vp2蛋白的多抗为检测抗体，以hrp标记的羊抗鸡igg为酶标抗体。
10、第五方面，本专利技术提供了一种用于检测鸡细小病毒的方法，包括使用单克隆抗体3f8或其抗原结合片段、或单克隆抗体3f8或其抗原结合片段；所述方法不包括疾病的诊断和治疗方法。
11、优选地，所述用于检测鸡细小病毒的方法为双抗体夹心elisa方法，以单克隆抗体3f8或其抗原结合片段、或单克隆抗体3f8或其抗原结合片段为捕获抗体，以鸡抗鸡细小病毒vp2蛋白的多抗为检测抗体，以hrp标记的羊抗鸡igg为酶标抗体。
12、第六方面，本专利技术提供了一种用途，包括单克隆抗体3f8或其抗原结合片段、和/或单克隆抗体3f8或其抗原结合片段、宿主细胞、用于检测鸡细小病毒的试剂盒、或用于检测鸡细小病毒的方法，在以下任一项中的用途：1)制备鸡细小病毒相关产品；2)鸡细小病毒检测，所述检测包括：流行病学分析，对离体的、非有生命的样本的检测、进出口检疫检测；3)鸡细小病毒vp2蛋白的功能验证；所述用途不包括疾病的诊断和治疗方法。
13、本专利技术的有益效果：
14、本专利技术通过单克隆抗体制备方法，以纯化的chpv vp2蛋白作为免疫本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种单克隆抗体或其抗原结合片段，为抗鸡细小病毒VP2蛋白的单克隆抗体3F8或其抗原结合片段；能够分泌产生所述单克隆抗体3F8的杂交瘤细胞株3F8已于2023年9月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号是CCTCC NO:C2023272，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述单克隆抗体3F8或其抗原结合片段的轻链为kappa链；和/或，所述单克隆抗体3F8或其抗原结合片段的重链为IgG2a亚型。
3.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述单克隆抗体3F8或其抗原结合片段，能够特异性结合鸡细小病毒、包含鸡细小病毒的感染性克隆株、或其抗原结合部位。
4.一种宿主细胞，能够产生权利要求1-3任一项中所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
5.一种制备方法，用于制备权利要求1-3任一项中所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包括以下步骤：
6.一种用于检测鸡细小病毒的试剂盒，其包括：权利要求1-3任一项中所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
7.根据权利要求6所述的用于检测鸡细小病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒采用双抗体夹心ELISA方法，以权利要求1-3任一项中所述的单克隆抗体为捕获抗体，以鸡抗鸡细小病毒VP2蛋白的多抗为检测抗体，以HRP标记的羊抗鸡IgG为酶标抗体。
8.一种用于检测鸡细小病毒的方法，其包括使用权利要求1-3任一项中所述的单克隆抗体或其抗原结合片段；所述方法不包括疾病的诊断和治疗方法。
9.根据权利要求8所述的用于检测鸡细小病毒的方法，其特征在于：所述方法为双抗体夹心ELISA方法，以权利要求1-3任一项中所述的单克隆抗体为捕获抗体，以鸡抗鸡细小病毒VP2蛋白的多抗为检测抗体，以HRP标记的羊抗鸡IgG为酶标抗体。
10.一种用途，包括权利要求1-3任一项中所述的单克隆抗体，权利要求4所述的宿主细胞，权利要求6-7任一项中所述的用于检测鸡细小病毒的试剂盒，或权利要求8-9任一项中所述的用于检测鸡细小病毒的方法，在以下任一项中的用途：
...【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体或其抗原结合片段，为抗鸡细小病毒vp2蛋白的单克隆抗体3f8或其抗原结合片段；能够分泌产生所述单克隆抗体3f8的杂交瘤细胞株3f8已于2023年9月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号是cctcc no:c2023272，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述单克隆抗体3f8或其抗原结合片段的轻链为kappa链；和/或，所述单克隆抗体3f8或其抗原结合片段的重链为igg2a亚型。
3.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述单克隆抗体3f8或其抗原结合片段，能够特异性结合鸡细小病毒、包含鸡细小病毒的感染性克隆株、或其抗原结合部位。
4.一种宿主细胞，能够产生权利要求1-3任一项中所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
5.一种制备方法，用于制备权利要求1-3任一项中所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包括以下步骤：
6.一种用于检测鸡细小病毒的试剂盒，其包括：...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢芝勋，廖健淇，张民秀，张艳芳，邓显文，谢丽基，罗思思，李孟，曾婷婷，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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