【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫检测领域。更具体地，涉及一种蛋白标签、含有其的融合蛋白或标记缀合物及其应用。
技术介绍
1、免疫检测(immunoassay，ia)是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。免疫检测是一种敏感的测定方法，抗原抗体反应后直接测定形成的沉淀或浊度，敏感度可达5～10μg/ml。但在临床检验中，某些待测物在标本中的含量远低于这一水平，因此要寻找增加敏感度的方法。标记的免疫检测是将检测试剂中的抗原或抗体用可微量测定的物质加以标记，通过测定标记物来提高敏感度。标记物有很多种，包括酶、化学发光物质、荧光物质、放射性物质、胶体以及上述物质的组合，其作用都是为了提高免疫检测的灵敏度，使其达到肉眼可分辨的水平或者机器可读出的水平。
2、免疫检测中，双抗原夹心法广泛应用于酶免疫检测、基于胶体的检测以及荧光检测等方面。双抗原夹心法主要原理是：在固相支持物上面包被抗原，封闭之后，加入待检标本，之后加入第二抗原标记之后的缀合物，先前形成的抗原-抗体复合物再与之结合成抗原-抗体-标记抗原复合物，然后借助一定的手段将信号放大，得出最终的判定结果。
3、免疫检测中，捕获法的应用也非常普遍。血清中针对某些抗原的特异性igm常和特异性igg同时存在，后者会干扰igm抗体的测定。因此测定igm抗体多用捕获法，先将所有血清igm(包括异性igm和非特异性igm)固定在固相上，在去除igg后再加入特异性抗原-标记物，显色。
4、竞争法可用于抗原及半抗原的定量测定，也
5、本专利技术中所述的标记缀合物，就是指上面提到的免疫检测中抗原-标记物的复合物。缀合物的活性对免疫检测的灵敏度有着决定性的影响，而高活性的缀合物需要具备两个条件：一方面，缀合物中单位抗原上结合的标记物要尽可能多；另一方面，缀合物中抗原的免疫学活性要尽可能高。因此，在标记物和标记方法限定的情况下，制备的缀合物活性好坏是由抗原的特点决定的，高活性的缀合物其抗原需要具备的条件是：
6、1.可溶性好，折叠构象正确。抗原的免疫学活性很大程度依赖于其空间构象，尤其是对抗原上面的构象型表位。抗原在表达时，如果作为包涵体的形式，一般来说都是没有正确折叠的。这种溶解性不好的抗原在标记之后一般活性不佳。
7、2.抗原表达量大，有利于大量生产。这一点是本领域技术人员公知的。
8、很多抗原在和标记物偶联之后，其缀合物的活性很低。通常的解决方法就是在抗原上融合表达一段蛋白标签，从而使表达出来的融合抗原在上述方面表现更好，从而具备优良的标记性能。
9、现有技术中的蛋白标签有trx、gst、dsba等，但这些蛋白标签共表达的融合抗原的的标记性能不佳。
10、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本申请专利技术人通过大量实验，意外发现了一种蛋白标签，这种蛋白标签提高了融合表达的蛋白的可溶性表达量，通过融合表达本专利技术的蛋白标签和抗原，大大增加了融合抗原的标记性能。在与标记物偶联之后，可以使抗原可溶性好，并保持抗原的天然免疫性，此标记缀合物用于免疫检测时，可以显著提高检测的灵敏度、特异性、稳定性。
2、根据本专利技术的一个方面，提供了一种蛋白标签，所述蛋白标签包含x1片段，所述x1片段氨基酸序列包括a-g-g-l-n-d-i-f-e-a-q-k-i-e-w-h-e-d-t-g。
3、根据本专利技术的第二个方面，提供了一种融合蛋白，包括上述的蛋白标签及蛋白部分。
4、进一步地，所述蛋白部分为抗原。
5、根据本专利技术的第三个方面，提供了一种标记缀合物，包括上述的融合蛋白及标记物，所述融合蛋白与标记物偶联形成所述标记缀合物。
6、根据本专利技术的第四个方面，提供了一种固相偶联物，包括上述的融合蛋白及固相载体，所述融合蛋白与固相载体偶联形成所述固相偶联物。
7、根据本专利技术的第五个方面，提供了一种编码上述的蛋白标签或融合蛋白的核酸、包含其的载体或细胞。
8、根据本专利技术的第六个方面，提供了一种融合蛋白及标记缀合物的制备方法。
9、根据本专利技术的第七个方面，提供了一种试剂或试剂盒。
10、最后，本专利技术还涉及上述的蛋白标签在提高蛋白可溶性表达量或提高标记缀合物活性中的应用。
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1.一种融合蛋白，包括蛋白标签及蛋白部分，其特征在于，所述蛋白标签包含X1片段，所述X1片段氨基酸序列为SEQ ID NO:2-4任一所示。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述蛋白标签还包括X2片段，所述X2片段氨基酸序列为SEQ ID NO:5-7任一所示。
3.一种融合蛋白，包括蛋白标签及蛋白部分，其特征在于，所述蛋白标签包含X2片段，所述X2片段氨基酸序列为SEQ ID NO:6-7任一所示。
4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述蛋白标签还包括X1片段，所述X1片段氨基酸序列为SEQ ID NO:1-4任一所示。
5.一种融合蛋白，包括蛋白标签及蛋白部分，所述蛋白标签包含：
6.根据权利要求1-5任一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述X1片段的个数为m个，所述X2片段的个数为n个，所述m为大于或等于1的整数，所述n为大于或等于0的整数；
7.根据权利要求1至6任一所述融合蛋白，其特征在于，所述片段之间通过接头序列进行连接，或所述片段之间直接进行连接；
8.根据权
9.一种标记缀合物，包括权利要求1-8任一项所述的融合蛋白及标记物，所述融合蛋白与标记物偶联形成所述标记缀合物；
10.一种固相偶联物，包括权利要求1-8任一项所述的融合蛋白及固相载体，所述融合蛋白与固相载体偶联形成所述固相偶联物；
11.一种编码权利要求1至8任一所述的融合蛋白的核酸。
12.一种包含权利要求11所述核酸的载体。
13.一种包含权利要求11所述核酸或权利要求12所述载体的细胞。
14.一种融合蛋白的制备方法，包括培养权利要求13所述的细胞。
15.一种标记缀合物的制备方法，所述方法包括将权利要求1-8任一项所述的融合蛋白与标记物进行偶联反应；
16.一种试剂盒，包括权利要求1-8任一项所述的融合蛋白和/或权利要求9所述的标记缀合物和/或权利要求10所述的固相偶联物。
17.权利要求1至8任一所述的融合蛋白中的蛋白标签在提高蛋白可溶性表达量中的应用。
18.权利要求1至8任一所述的融合蛋白中的蛋白标签在提高标记缀合物活性中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，包括蛋白标签及蛋白部分，其特征在于，所述蛋白标签包含x1片段，所述x1片段氨基酸序列为seq id no:2-4任一所示。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述蛋白标签还包括x2片段，所述x2片段氨基酸序列为seq id no:5-7任一所示。
3.一种融合蛋白，包括蛋白标签及蛋白部分，其特征在于，所述蛋白标签包含x2片段，所述x2片段氨基酸序列为seq id no:6-7任一所示。
4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述蛋白标签还包括x1片段，所述x1片段氨基酸序列为seq id no:1-4任一所示。
5.一种融合蛋白，包括蛋白标签及蛋白部分，所述蛋白标签包含：
6.根据权利要求1-5任一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述x1片段的个数为m个，所述x2片段的个数为n个，所述m为大于或等于1的整数，所述n为大于或等于0的整数；
7.根据权利要求1至6任一所述融合蛋白，其特征在于，所述片段之间通过接头序列进行连接，或所述片段之间直接进行连接；
8.根据权利要求1至7任一所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：孟媛，李俊，于秀玲，
申请(专利权)人：东莞市朋志生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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