一种猪环曲病毒RT-PCR检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种猪环曲病毒RT-PCR检测试剂盒及其检测方法，试剂盒组成包括：阳性对照模板：对猪环曲病毒的阳性样品抽提RNA，逆转录后获得的cDNA，共20ul，每次1ul；阴性对照样品：SPF猪粪便样品和PBS按SPF猪粪便样品的重量∶PBS的体积＝0.5～1.0∶1加入PBS混匀，3000r/min离心15min，取上清液抽提RNA，逆转录后获得的cDNA，共20ul，每次用1ul；上游引物P1和下游引物P2浓度均为10pmol/ul，各30ul，每个样品各用0.5ul；2×Taq?PCR?Master?Mix：300ul，每个样品用10ul；ddH2O：200ul，每个样品用8ul。本发明专利技术与现有技术相比有以下优点：灵敏度较高，最低可以检测10pg病毒核酸；检测时间短，可用于大批样品的检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及猪的一种病毒抗原检测试剂盒，具体说是一种猪环曲病毒核酸RT-PCR快速诊断试剂盒及其检测方法。
技术介绍
猪环曲病毒(Porcine Torovirus,PToV)为冠状病毒科,环曲病毒属成员。基因组为单股正链RNA，大小约为25-30kb。根据国际病毒分类委员会确认环曲病毒属主要有马环曲病毒(Equine Torovirus,EToV)、猪环曲病毒、牛环曲病毒(Bovine Torovirus,BToV)和人环曲病毒(Human Torovirus,HToV)。有报道指出，环曲病毒在全世界范围内广泛分布,从1987年首次报道猪环曲病毒以来，在荷兰、加拿大、南非、美国、匈牙利和英格兰等国家相继被报道。目前，普遍认为环曲病毒与腹泻相关，但在其病毒结构和功能、发病机理、致病性等 方面还存在许多问题尚未得到解决。猪环曲病毒感染主要引起一些亚临床症状，病毒在粪便中存在的时间相对较短，目前还无法在培养的组织细胞中生长繁殖。因此，研发一种针对猪环曲病毒的快速准确RT-PCR检测试剂盒，对于我国猪群中环曲病毒分子流行病学调查和其他相关研究意义重大。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪环曲病毒RT?PCR检测试剂盒，其特征在于，按照每个试剂盒检测20个样品计，每次检测样品时设阳性、阴性对照，试剂盒组成包括：阳性对照模板：对猪环曲病毒的阳性样品抽提RNA，逆转录后获得的cDNA，共20ul，每次1ul；阴性对照样品：SPF猪粪便样品和PBS按SPF猪粪便样品的重量∶PBS的体积＝0.5～1.0∶1加入PBS混匀，3000r/min离心15min，取上清液抽提RNA，逆转录后获得的cDNA，共20ul，每次用1ul；上游引物P1：5’?ACCCCTGCCTGAGGTTTCYTT?3’，下游引物P2：5’?AGCACGACGTTGTCTRCGTGT?3’，上游引物P1和下游...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱玲，徐志文，周璐，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：