一种A组轮状病毒实时等温扩增检测试剂盒及其引物和探针制造技术

技术编号:8410160 阅读:229 留言:0更新日期:2013-03-14 00:44
本发明专利技术涉及一种基于实时核酸序列依赖性扩增(Nucleicacidsequence-basedamplification,NASBA)技术的肠道病原体快速检测技术。具体提供了一种A组轮状病毒实时等温扩增检测试剂盒及其一对引物和一条分子信标探针。所述试剂盒包括含有上述引物和探针的2×实时NASBA反应液、5×酶混合液及阳性对照模板、阴性对照和空白对照。所述引物和探针序列是序列编号为SEQIDNO:1~3所示的序列,能特异性扩增和检测A组轮状病毒VP6基因。本发明专利技术的试剂盒具有快速、高效、敏感特异和实时检测分析等特点,可应用于临床和口岸的常规检测和疾病防控领域。????

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基于实时核酸序列依赖性扩增(Nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)技术的肠道病原体快速检测技术。具体涉及A组轮状病毒实时NASBA等温扩增快速检测试剂盒;还涉及所述试剂盒中使用的对于A组轮状病毒VP6基因具有特异性的引物对和分子信标探针。
技术介绍
A组轮状病毒(Rotavirus,RV)是世界范围内引起婴幼儿重症腹泻的最主要病原,占儿科肠道感染病因的50%以上,其基因组由11个不连续的双链RNA基因片段组成,其中VP6基因编码的结构蛋白所存在的抗原性差异是轮状病毒分组的依据。A组轮状病毒也是导致发展中国家婴幼儿死亡的主要病因之一,资料显示,全世界每年约有60万5岁以下儿童的死亡与A组轮状病毒感染有关。因此,一套简便快速、特异性强的A组轮状病毒检测技术,可以为腹泻病的防控和临床诊断提供有力的技术支持。目前,针对轮状病毒的检测,经典的方法有电镜观察、病毒分离培养、核酸杂交、酶联免疫等。电镜观察不但敏感度低、而且价格昂贵、设备和技术条件要求甚高,无法应用于临床常规检测和大规模的流本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种A组轮状病毒检测用引物,其特征在于,包括正向引物F1和反向引物R1,所述正向引物F1和所述反向引物R1的碱基序列表示如下:正向引物F1:5’?AACATCATGCWACRGTWGGACT?3’;反向引物R1:?5’?AATTCTAATACGACTCACTATAGGGCAGATGGTTAGYYTGGTCCTYA?3’。

【技术特征摘要】
1.一种A组轮状病毒检测用引物,其特征在于,包括正向引物F1和反向引物R1,所述正向引物F1和所述反向引物R1的碱基序列表示如下:
正向引物F1:5’-AACATCATGCWACRGTWGGACT-3’;
反向引物R1: 
5’-AATTCTAATACGACTCACTATAGGGCAGATGGTTAGYYTGGTCCTYA-3’。
2.根据权利要求1所述的一种A组轮状病毒检测用引物,其特征在于:所述反向引物R1的5’端的25个碱基是增加的T7噬菌体启动子序列,而3’端22个碱基是与A组轮状病毒VP6基因靶RNA互补的特异性序列,所述正向引物F1和所述反向引物R1的3’端的病毒核酸变异位点使用简并碱基。
3.一条A组轮状病毒检测用分子信标探针,其特征在于,所述分子信标探针的碱基序列表示如下:
分子信标探针P1:
5’-FAM-CGATCGTATGCNRTACCRGTTGGACCCGATCG-DABCYL-3’,
所述分子信标探针P1在其寡核苷酸DNA分子的5’端标记荧光报告基团FAM,3’端标记荧光淬灭基团DABCYL。
4.根据权利要求3所述的一条A组轮状病毒检测用分子信标探针,其特征在于:所述分子信标探针P1的5’端和3’端...

【专利技术属性】
技术研发人员:莫秋华伍碧梅赵俊华杨泽谭华林继灿杜田
申请(专利权)人:珠海国际旅行卫生保健中心
类型:发明
国别省市:

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