一种线性化表达载体构建方法及用于线性化表达载体构建的类载体片段技术

本发明专利技术提供了一种线性化表达载体构建方法及用于线性化表达载体构建的类载体片段，本发明专利技术的线性化表达载体构建方法包括下列步骤：设计并构建前类载体片段、后类载体片段及目的基因片段；将前类载体片段、后类载体片段及目的基因片段采用连接酶连接获得线性双链DNA表达载体。本发明专利技术还进一步提供了用于线性化表达载体构建的类载体片段。本发明专利技术通过高效准确的连接反应制备类似线性化载体片段，避开了通过繁琐耗时的环状质粒载体的构建而获得线性化载体片段的过程，同时目的基因末端的产生不受其序列的限制可以极大简化操作、降低成本并缩短实验周期，在酵母等表达系统中具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物基因重组表达技术，具体涉及一种通过高效准确的连接反应直接构建线性化载体片段实现线性化表达载体构建方法及用于线性化表达载体构建的类载体片段。
技术介绍
基因重组表达技术在当今的生物科学研究及产业化中有着越来越广泛的应用。目前，基因重组表达的宿主生物有很多种，比如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母和哺乳动物细胞等。很多情况下，在利用这些宿主生物表达目的基因时需要先在大肠杆菌中构建一个正确插入目的基因的环状质粒载体，将该载体提纯、线性化后再转化宿主生物，目的基因通过同源重组整合到宿主生物的基因组中，根据筛选基因可获得稳定表达的克隆子。比如常用 毕式酵母(Pichia pastoris)的pPIC9K载体(Invitrogen)和中国仓鼠卵巢细胞CHO的pOptiVECtm-TOPO 载体(Invitrogen)都属此类。图 2 以毕式酵母(Pichia pastoris)的菌株GS115和载体pPIC9K表达绿色荧光蛋白GFP为例说明该重组表达过程的基本步骤。从图中可知该重组表达过程基本上由17步操作完成，其中有15步操作是在构建一个线性化载体片段，期间需要多次细菌培养、质粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种线性化表达载体构建方法，包括下列步骤：1)设计前类载体片段、后类载体片段及目的基因片段，所述前类载体片段、后类载体片段及目的基因片段满足下列要求；所述目的基因片段含有目的基因且两个末端均为5’冗余粘性末端；所述目的基因片段的5’冗余粘性末端同时满足下列要求：a)单个5’冗余粘性末端的冗余碱基个数为1？10个；b)两个5’冗余粘性末端的冗余碱基选自A、T、C和G中的至多三种，且任一冗余碱基均与目的基因片段中任一单链DNA的3’端首个碱基的互补碱基不同，冗余末端由T4？DNA聚合酶降解产生；所述前类载体片段的一个末端为5’冗余粘性末端，且与所述目的基因片段中，编码链5’端对应的5’冗余粘性末端...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：尚玉栓，
申请(专利权)人：尚玉栓，
类型：发明
国别省市：