改造微生物获得改进表型的方法技术
【技术实现步骤摘要】
改造微生物获得改进表型的方法
本专利技术涉及一种改造微生物获得改进表型的方法。特别是涉及一种通过增加微生物自身基因组DNA在复制时产生错误的频率，使微生物在生长过程中不断发生基因组DNA突变，从而连续、快速地获得改进表型的方法。
技术介绍
随着化石资源枯竭和环境问题恶化，将微生物作为细胞工厂来生产燃料、化学品等的潜力正日益凸显。据经合组织(OECD)预计，到2030年大约将有35％的化学品来自工业生物技术(http://scitech.people.com.cn/GB/14883438.html)。但是天然的微生物往往存在产量低、生长过程受多种化合物抑制、对生产过程中环境条件要求严格等缺点，因此，改造微生物，使之具备高产、耐受抑制物、抵抗酸度、温度等环境压力胁迫的能力，一直是工业生物
的核心目标。现有的微生物改造技术主要包括以下几类。第一类以基因工程和代谢工程为代表(Wendisch,V.F.,etal.(2006).MetabolicengineeringofEscherichiacoliandCorynebacteriumglutamicumforbio...
【技术保护点】
一种改造微生物、获得改进表型的方法，其包括下述步骤：a)对微生物中参与基因组DNA复制和/或修复的DNA聚合酶的基因进行突变，获得具有不同基因组复制突变率和/或突变偏好性的DNA聚合酶基因的突变体文库；b)将该DNA聚合酶基因突变体文库导入微生物细胞中，实现各个DNA聚合酶基因突变体的表达，获得一个具有不同基因组DNA复制突变率和/或突变类型的微生物突变体文库；c)在目标表型筛选压力下培养该微生物突变体文库，并从中筛选出具有改进表型的微生物突变体，优选地，所述目标表型筛选压力被不断提高；d)可选地，重复步骤c)以产生更好的微生物表型。
【技术特征摘要】
1.一种改造微生物、获得改进表型的方法，其包括下述步骤：a)对微生物中参与基因组DNA复制和/或修复的DNA聚合酶的基因进行突变，获得具有不同基因组复制突变率和/或突变偏好性的DNA聚合酶基因的突变体文库；b)将该DNA聚合酶基因突变体文库导入微生物细胞中，实现各个DNA聚合酶基因突变体的表达，获得一个具有不同基因组DNA复制突变率和/或突变类型的微生物突变体文库；c)在目标表型筛选压力下培养该微生物突变体文库，并从中筛选出具有改进表型的微生物突变体，其中所述的DNA聚合酶基因突变体文库的大小是1×106至1.5×106。2.一种改造微生物、获得改进表型的方法，其包括下述步骤：a)对微生物中参与基因组DNA复制和/或修复的DNA聚合酶的基因进行突变，获得具有不同基因组复制突变率和/或突变偏好性的DNA聚合酶基因的突变体文库；b)将该DNA聚合酶基因突变体文库导入微生物细胞中，实现各个DNA聚合酶基因突变体的表达，获得一个具有不同基因组DNA复制突变率和/或突变类型的微生物突变体文库；c)在目标表型筛选压力下培养该微生物突变体文库，并从中筛选出具有改进表型的微生物突变体，其中所述的DNA聚合酶基因突变体文库的大小是0.5×106至1.0×106。3.一种改造微生物、获得改进表型的方法，其包括下述步骤：a)对微生物中参与基因组DNA复制和/或修复的DNA聚合酶的基因进行突变，获得具有不同基因组复制突变率和/或突变偏好性的DNA聚合酶基因的突变体文库；b)将该DNA聚合酶基因突变体文库导入微生物细胞中，实现各个DNA聚合酶基因突变体的表达，获得一个具有不同基因组DNA复制突变率和/或突变类型的微生物突变体文库；c)在目标表型筛选压力下培养该微生物突变体文库，并从中筛选出具有改进表型的微生物突变体，其中所述的DNA聚合酶基因突变体文库的大小是0.8×106至1.3×106。4.根据权利要求1至3任一项所述的改造微生物、获得改进表型的方法，其中所述的目标表型筛选压力被不断提高。5.根据权利要求1至3任一项所述的改造微生物、获得改进表型的方法，在步骤c)之后还包括：d)重复步骤c)以产生更好的微生物表型。6.根据权利要求1至3任一项所述的改造微生物、获得改进表型的方法，还包括步骤：e)将筛选出的具有改进表型的微生物突变体的基因组DNA复制突变率恢复到正常细胞水平。7.根据权利要求6所述的改造微生物、获得改进表型的方法，其中所述的步骤e)是通过以下方式进行的：将筛选出的具有改进表型的微生物突变体中的DNA聚合酶突变体去除和/或替换成具有正常突变率的野生型DNA...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡真，栾国栋，李寅，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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