利用pCold-sumo表达载体高效表达PCV 2 Cap蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用pCold-sumo表达载体高效表达PCV?2?Cap蛋白的方法，该方法包括以下步骤：抽提PCV?2病毒的DNA，扩增得到PCV?2去核定位信号肽的Cap蛋白的基因片段；将扩增片段连接到pCold-SUMO质粒中，构建重组质粒pCold-SUMO-dCap；将重组质粒转化大肠杆菌ArcticExpress?Escherichia?coli，然后低温诱导表达，表达产物经纯化后得到可溶性的sumo-dCap融合蛋白。本发明专利技术的方法能成功克服PCV?2?Cap蛋白在大肠埃希菌中不表达或是表达量极低的难题；本发明专利技术方法所表达的Cap蛋白主要以可溶性形式存在、纯化方法简单可行、纯化效果很好、具有很好的免疫学反应原性，可以应用于流行病学诊断方法的建立及疫苗的研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种利用pCold-sumo表达载体高效表达猪圆环病毒2型(PCV2)的缺失核定位信号肽的Cap蛋白的方法。
技术介绍
猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)是近年来新发现的一种重要病原微生物，该病毒被认为是断乳仔猪多系统衰竭综合征(Post-weaning multisystemicwasting syndrome,PMWS)的主要病原(Allan, Meehan et al. 1998)。PCV2 的感染，会使动物机体产生免疫抑制，使机体的免疫抵抗力下降，造成其它病原的继发感染，从而引起更加严重的临床症状。PCV2除了引起PMWS而外，还可导致猪皮炎/肾病综合征(Porcine dermatitis and nephropathy sundrome, PDNA)、猪呼吸道病复合症(Porcine respiratorydisease complex, PRDC)等相关疾病(Allan, McNeilly et al. 2000;Kim, Chung etal. 2003; Ramamoorthy and 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用pCold？sumo表达载体高效表达PCV？2？Cap蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）抽提PCV2病毒的DNA；根据PCV？2？ORF2的序列设计引物，扩增得到PCV2去核定位信号肽的Cap蛋白的基因片段；（2）将步骤（1）扩增得到的基因片段连接到pCold？SUMO质粒中，构建重组质粒pCold？SUMO？dCap；（3）将重组质粒pCold？SUMO？dCap转化大肠杆菌ArticExpress？Escherichia？coli，得到重组大肠杆菌Artic？Exp.E.coli／pCold？Sumo？dCap；然后对重组大肠杆菌Artic？Exp.E.coli／pCold...

【技术特征摘要】
1.ー种利用pCold-sumo表达载体高效表达PCV 2 Cap蛋白的方法,其特征在于包括以下步骤 (1)抽提PCV2病毒的DNA;根据PCV 2 0RF2的序列设计引物，扩增得到PCV2去核定位信号肽的Cap蛋白的基因片段； (2)将步骤(I)扩增得到的基因片段连接到pCold-SUMO质粒中，构建重组质粒pCold-SUMO-dCap ； (3)将重组质粒pCold-SUMO-dCap 转化大肠杆菌 ArticExpress Escherichia coli,得到重组大肠杆菌Artic Exp. E. coli / pCold-Sumo-dCap ;然后对重组大肠杆菌Artic Exp.E. coli / pCold-Sumo-dCap低温诱导表达,表达产物经纯化后得到可溶性的sumo_dCap融合蛋白； 步骤(I)所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊惠英，廖明，陈春丽，叶昱，张杰，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：