同向串联共表达双色荧光蛋白报告基因载体制造技术

本发明专利技术涉及同向串联共表达双色荧光蛋白报告基因载体pDsRed2-MCS-EGFP。它是在载体pIRES2-EGFP的基础上，经PCR反应获得缺失IRES和EGFP序列的载体骨架pΔSG，构建其T载体克隆psT-ΔSG，酶切后与同步酶切的、携带附加优化MCS序列的荧光蛋白报告基因DsRed2、EGFP进行连接、亚克隆而得。将待分析目的DNA序列定向克隆入pDsRed2-MCS-EGFP的MCS区，获得的重组质粒转染相应宿主细胞，DsRed2的本底表达指示转染效率，EGFP的表达有赖MCS区目的DNA序列的活性，其表达与否及表达量的多少，皆作为指征目的DNA序列是否具有相应生物活性及其高低。优化的MCS序列适合更广泛的基因克隆操作；DsRed2和EGFP表达的检测时效范围宽，且相互独立、互为表征，成像效果清晰、鲜明，使实验操作更简便，结果更具说服力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及同向串联共表达双色荧光蛋白报告基因载体，是用于鉴定外源目的DNA片段是否具有启动转录或起始翻译功能的载体质粒。
技术介绍
含有筛选标记的转基因载体在基因工程中具有广泛的用途。常见转基因载体包含有一个或多个筛选标记或报告基因，以方便对插入外源核苷酸片段重组质粒的筛选和鉴定。其中荧光蛋白基因在活细胞中的表达产物具有生物活性稳定、信号特异性强、有效活性维持时间长、方便检测和对外源目的基因表达活性干扰小等特点，所以常利用荧光蛋白基因的表达来研究外源核苷酸片段的功能。通常情况下，同一报告基因载体中仅含有一个荧 光蛋白基因，将目的DNA片段克隆到荧光蛋白基因的N端或C端，构建的重组质粒转染相应宿主细胞，通过检测荧光蛋白的表达即可判定目的核酸片段是否具有相应功能，但难以同步反映重组报告基因质粒的转染效率和判定目的DNA的生物功能。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种同向串联共表达双色荧光蛋白报告基因载体pDsRed2-MCS-EGFP，2012年07月06日送藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址是北京市朝阳区北辰西路I号院3号，分类命名大肠埃希氏菌(Escheri本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种DNA分子，其特征是：经优化MCS序列串联的可同向串联共表达双色荧光蛋白报告基因载体质粒pDsRed2？MCS？EGFP，具有SEQ？NO.1中第609？2085nt的DNA序列。

【技术特征摘要】
1.一种DNA分子，其特征是经优化MCS序列串联的可同向串联共表达双色荧光蛋白报告基因载体质粒pDsRed2-MCS-EGFP，具有SEQ NO. I中第609_2085nt的DNA序列。2.含有权利要求I所述报告基因载体质粒的构建方法。3.根据权利要求2所述的报告基因载体质粒，其特征在于pCMV下游连接有优化MCS串联表达的双色荧光蛋白报告基因序列DsRed2-MCS-...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉，于爱莲，姜世金，施鲁笛，
申请(专利权)人：泰山医学院，
类型：发明
国别省市：