人类KRAS基因突变检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种人类KRAS基因突变检测试剂盒及检测方法，具有较高的灵敏度和准确性，克服传统PCR荧光探针法特异性不足、存在假阳性的缺点。该试剂盒通过使用肽核酸(PNA)技术，能够大大降低野生型背景信号，从而提高检测结果的特异性，能检出含10ng基因组中低至0.1％的KRAS突变。此外本试剂盒中的PCR反应液中包括酶溶液等，可直接加入样本检测，简化了操作步骤，使得检测过程更加快捷方便。

【技术实现步骤摘要】
人类KRAS基因突变检测试剂盒及检测方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种人类KRAS基因突变检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
RAS基因家族与人类肿瘤相关的基因有三种一一Hras、Kras和Nras,分别定位在11、12和1号染色体上。Kras因编码21kD的RAS蛋白又名p21基因。在RAS基因中,Kras对人类癌症影响最大。Kras基因就像体内一个“开关”当正常时能控制调控细胞生长的路径；发生异常时,则导致细胞持续生长,并阻止细胞自我毁灭。因此,基因在肿瘤细胞生长以及血管生成等过程的信号传导通路中起着重要调控作用,正常的Kras基因可抑制肿瘤细胞生长,而一旦Kras基因发生突变,它就会持续刺激细胞生长,使细胞内信号传导紊乱,打乱生长规律,细胞增殖失控而癌变,从而导致肿瘤的发生。在不同的癌症当中存在不同的Kras基因突变的比例胰腺癌90％、结肠癌50％、肺癌30％、卵巢癌15％、甲状腺癌50％、膀肌癌6％左右另外,红斑性狼疮、乳腺癌、肝癌、皮肤癌、类风湿性关节炎、肾癌及某些的白血病等都有较高的Kras基因突变水平。肿瘤患者KRAS突变与否显著影响EGFR靶向治疗药物的疗效本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人类KRAS基因突变检测试剂盒，其特征在于，含有针对KRAS基因突变位置的PNA肽核酸修饰的特异探针。

【技术特征摘要】
1.一种人类KRAS基因突变检测试剂盒，其特征在于，含有针对KRAS基因突变位置的PNA肽核酸修饰的特异探针。2.根据权利要求1所述人类KRAS基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述肽核酸修饰的探针核苷酸序列为5'-GAGCTGGTGGCGTAG-3'SEQIDNO.1。3.根据权利要求1所述人类KRAS基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括检测KRAS基因7种突变的7对特异性引物和1种特异性探针，7对特异性引物是由7种ARMS引物及1种通用下游引物组成；所述引物探针序列如下：ARMS引物1：5'-ACTCTTGCCTACGCCAT-3'SEQIDNO.2ARMS引物2：5'-ACTCTTGCCTACGCCAG-3'SEQIDNO.3ARMS引物3：5'-CACTCTTGCCTACGCCAA-3'SEQIDNO.4ARMS引物4：5'-CTCTTGCCTACGCCACT-3'SEQIDNO.5ARMS引物5：5'-ACTCTTGCCTACGCCACG-3'SEQIDNO.6ARMS引物6：5'-ACTCTTGCCTACGCCACA-3'SEQIDNO.7ARMS引物7：5'-GTAGTTGGAGCTGGTGA-3'SEQIDNO.8通用下游引物：5'-CTATTGTTGGATCATATTCGTC-3'SEQIDNO.9特异性探针：FAM-5'-GAGTGCCTTGACGATACA-3'-NFQ-MGBSEQIDNO.10。4.根据权利要求1所述人类KRAS基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括外控系统及内控系统，所述外控系统为一对外控引物和相应的外控探针，所述内控系统为一对内控引物和相应的内控探针，具体序列如下：外控引物：正向引物F：5'-TCCTGATTTCTGGAAAAGA-3'SEQIDNO.1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李同恩，罗玺，师鸿翔，陈兴京，王蓉蓉，崔斌，陶然，朱兵，
申请(专利权)人：中源协和基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12