本发明专利技术涉及杂交瘤细胞株AFM1B7、其单克隆抗体及黄曲霉毒素M1流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒。杂交瘤细胞株AFM1B7，保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC?NO.C201020。其分泌产生的单克隆抗体灵敏度高、特异性好，对黄曲霉毒素M1的50%抑制浓度为52pg/mL，与黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素的交叉反应率均小于0.3%。由该单克隆抗体获得的黄曲霉毒素M1流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒可用于黄曲霉毒素M1含量的定量测定，操作简单，快速，准确度高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及杂交瘤细胞株AFM1B7、其单克隆抗体及黄曲霉毒素Ml流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒。
技术介绍
黄曲霉毒素主要是由黄曲霉和寄生曲霉分泌产生的次生代谢产物，是能引起人畜各种损害的天然有毒化合物。黄曲霉毒素目前已发现20余种，主要包括黄曲霉毒素Al(AFA1)、B2 (AFB2)、AFG和Ml (AFMl)等。黄曲霉毒素Ml (AFMl)是AFBl的羟基化代谢产物，哺乳动物摄入AFBl污染的饲料后，在体内经羟基化会分泌于乳汁当中。通常当动物摄入了 AFBl污染的食物后，AFMl的排出量为AFBl摄入量的1% 3%。大量的研究者对AFMl的毒性和致癌性进行了深入的研究，研究结果也促使国际癌症研究机构将AFMl的致癌等级由二类致癌物质变为一类致癌物质。AFMl性质稳定，即使经过巴氏杀菌，也几乎完全不能被破坏。在许多乳制品中均含有AFMl。由于乳制品是婴幼儿食物的主要来源，因此AFMl污染问题引起了世界各国的广泛关注，并对AFMl进行了严格的限量。我国属于黄曲霉毒素污染较重的地区，因此加强乳及乳制品中黄曲霉毒素Ml的检测、特别是速测，及时了解和掌握乳及乳制品的卫生信息，对保障我国食品消费安全具有重要意义。 现有黄曲霉毒素的检测方法包括薄层层析 法、精密仪器分析法和免疫学分析法。其中薄层层析法是较早用于检测黄曲霉毒素最常用的检测方法，该法不需要特殊的仪器设备，一般实验室都可进行，但试剂用量大、操作繁琐、其它组分干扰严重、准确性差，不能准确定量，且对实验人员和周围环境污染危害较大，不适于现场快速检测。精密仪器分析法主要包括荧光分光光度法和高效液相色谱法，这些方法灵敏度高，准确性好，但又有仪器昂贵，要求黄曲霉毒素样品纯化程度高，样品前处理过程繁琐，耗时长，对实验环境要求高等不足，难以实现快速检测。免疫分析技术克服了前两者的缺点，具有特异性强、灵敏度高、样品前处理简单、成本低、对实验人员和周围环境的污染危害小、适于现场批量检测等优点，已应用于食品、医疗等多个领域。
技术实现思路
本专利技术所要解决的问题是提供杂交瘤细胞株AFM1B7、其单克隆抗体及黄曲霉毒素Ml流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒。本专利技术提供了杂交瘤细胞株AFM1B7，该细胞株已于2010年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCN0.C201020。其具有序列表中SEQ ID N0.1所示的单克隆抗体重链可变区编码基因序列和序列表中SEQ ID N0.2所示的单克隆抗体轻链可变区编码基因序列。单克隆抗体，它由保藏编号为CCTCC N0.C201020的杂交瘤细胞株AFM1B7分泌产生。其重链可变区具有序列表中SEQ ID N0.3所示的氨基酸序列；轻链可变区具有序列表中SEQID N0.4所示的氨基酸序列。该单克隆抗体可以识别黄曲霉毒素M1，对黄曲霉毒素Ml的50%抑制浓度IC50为52pg/mL。黄曲霉毒素Ml流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒，其特征在于:它包括荧光试纸条和含有铕标记的抗黄曲霉毒素Ml单克隆抗体冻干品的样品反应瓶，其中:所述的荧光试纸条包括纸板，纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线上包被黄曲霉毒素Ml-牛血清白蛋白偶联物(AFBl-BSA);所述抗黄曲霉毒素Ml单克隆抗体为由保藏编号为CCTCC N0.C201020的杂交瘤细胞株AFM1B7分泌产生的单克隆抗体。按上述方案，所述铕标记的抗黄曲霉毒素Ml单克隆抗体是按照以下方法制备得到的:将保藏编号为CCTCC N0.C201020的杂交瘤细胞株AFM1B7分泌产生的单克隆抗体(抗黄曲霉毒素Ml单克隆抗体)用碳酸盐缓冲溶液透析后和铕标记试剂以质量比为0.5 2:1的比例充分混匀后静置过夜，然后经S印hadex G_50层析柱分离铕标记的抗黄曲霉毒素Ml单克隆抗体，洗脱，收集目标产物。按上述方案，所述突光试纸条中的吸水垫长15 20mm,宽3 4mm ;检测垫长25 30mm,宽3 4mm ;样品垫长12 18mm,宽3 4mm,相邻各垫的交叠长度为I 3_。按上述方案，所述荧光试纸条中检测垫上的检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15 20mm,质控线和检·测线的间距为5 IOmm ;所述的样品反应瓶为l_5mL的卡口瓶。按上述方案，所述荧光试纸条中检测垫上每厘米检测线所需的黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物的包被量为50 IOOng ;每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为30 IOOg ;所述样品反应瓶中铕标记的抗黄曲霉毒素Ml单克隆抗体冻干品的含量为0.05-0.25 μ g。按上述方案，所述的荧光试纸条是采用以下方法获得的:(I)将吸水纸剪裁得吸水垫；(2)检测垫的制备:将黄曲霉毒素M-牛血清白蛋白的偶联物AFMl-BSA配制成浓度为0.1 0.4mg/mL的包被液，于距硝酸纤维素膜上沿10 15mm的位置，用线喷方式将其横向包被于硝酸纤维素膜上，得到检测线，每厘米检测线所需黄曲霉毒素Ml-牛血清白蛋白的偶联物AFMl-BSA的包被量为50 lOOng，然后于37 40°C条件下干燥30 60分钟；将兔抗鼠多克隆抗体配成浓度为0.1 0.4mg/mL的包被液,于距检测线5 IOmm的位置，用线喷方式将其横向包被于硝酸纤维素膜上，得质控线，每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为30 lOOng，然后于37 40°C条件下干燥30 60分钟；(3)样品垫的制备:将玻璃纤维膜放入封闭液中浸湿，取出，于37 40°C条件下干燥3 6小时,得样品垫，然后置干燥器中室温保存；(4)荧光试纸条的组装:在纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，交叠长度为I 3mm,即得突光试纸条。按上述方案，所述荧光试纸条的制备中配制黄曲霉毒素Ml-牛血清白蛋白偶联物(AFMl-BSA)包被液中所使用的包被缓冲液为:每IOmL中含有牛血清白蛋白0.lg，叠氮化钠0.002g,氯化钠0.08g,十二水磷酸氢二钠0.029g,氯化钾0.002g,磷酸二氢钾0.002g ；配制兔抗鼠多克隆抗体包被液中所使用的包被缓冲液为 每IOmL中含有叠氮化钠0.002g,氯化钠0.08g,十二水磷酸氢二钠0.029g,氯化钾0.002g,磷酸二氢钾0.002g ；所述荧光试纸条的制备中使用的封闭液为■ 每IOOmL中含有卵清白蛋白0.5~2g,蔗糖2g，叠氮化钠0.02g,氯化钠0.8g，十二水磷酸氢二钠0.29g，氯化钾0.02g,磷酸二氢钾0.02go按上述方案，所述黄曲霉毒素Ml流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒还包括样品稀释液及样品稀释液吸管，所述的样品稀释液为体积分数为0.01 0.30%的吐温-20水溶液。上述黄曲霉毒素Ml流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒在黄曲霉毒素Ml含量检测中的应用:将待测样品液加入样品反应瓶中，混匀，插入荧光试纸条，37°C反应6分钟后，用时间分辨荧光测试仪进行检测，获得荧光试纸条上检测线(T本文档来自技高网...
【技术保护点】
杂交瘤细胞株AFM1B7，其特征在于：它保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC?NO.C201020。
【技术特征摘要】
1.杂交瘤细胞株AFM1B7，其特征在于:它保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为 CCTCC N0.C201020。2.单克隆抗体，其特征在于:它由保藏编号为CCTCCN0.C201020的杂交瘤细胞株AFM1B7分泌产生。3.黄曲霉毒素Ml流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒，其特征在于:它包括荧光试纸条和含有铕标记的抗黄曲霉毒素Ml单克隆抗体冻干品的样品反应瓶，其中:所述的荧光试纸条包括纸板，纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线上包被黄曲霉毒素Ml-牛血清白蛋白偶联物(AFBl-BSA);所述的抗黄曲霉毒素Ml单克隆抗体为权利要求1所述的保藏编号为CCTCC N0.C201020的杂交瘤细胞株AFM1B7分泌产生的单克隆抗体。4.根据权利要求3所述的黄曲霉毒素Ml流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒，其特征在于:所述铕标记的抗黄曲霉毒素Ml单克隆抗体是按照以下方法制备得到的:将权利要求I所述的保藏编号为CCTCC N0.C201020的杂交瘤细胞株AFM1B7分泌产生的单克隆抗体用碳酸盐缓冲溶液透析后和铕标记试剂以质量比为0.5 2:1的比例充分混匀后静置过夜，然后经S印hadex G-50层析柱分离铕标记的抗黄曲霉毒素Ml单克隆抗体，洗脱，收集目标产物。5.根据权利要求3所述的黄曲霉毒素Ml流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒，其特征在于:所述突光试纸条中的吸水垫长15 20mm,宽3 4mm ;检测垫长25 30mm,宽3 4mm ;样品垫长12 18mm,宽3 4mm,相邻各垫的交叠长度为I 3mm ;所述检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15 20mm，质控线和检测线的间距为5 IOmm ;所述的样品反应瓶为l_5mL的卡口瓶。6.根据权利要求3所述的黄曲霉毒素Ml流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒，其特征在于:所述荧光试纸条中检测垫上每厘米检测线所需的黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物的包被量为50 IOOng ;每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为30 IOOg ;所述样品反应瓶中铕标记的抗黄曲霉毒素Ml单克隆抗体冻干品的含量为0.05-0.25 μ g。7.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素Ml流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒，其特征在于:所述的荧光试纸条是采用以下方法获得的: (1)将吸水纸剪裁得吸水垫； (2)检测垫的制备: 将黄曲霉毒素M-牛血清白蛋白的偶联物AFM...
【专利技术属性】
技术研发人员：李培武，李冉，张奇，丁小霞，张文，张兆威，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：
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