本发明专利技术涉及一种本可分泌抗CA125蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC?No：C201318。上述杂交瘤细胞的分泌产量高，其分泌得到的抗CA125蛋白单克隆抗体具有高亲和力、高特异性等优点，可广泛应用在制备CA125蛋白的检测领域，如检测试剂或检测设备的制备领域等，在特异性、灵敏度和检测率等方面较之传统的检测方法或检测试剂具有显著的优势。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤免疫检测领域，尤其是涉及一种可分泌抗CA125蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及应用。
技术介绍
CA125蛋白是1983年由Bast等人从上皮性卵巢癌抗原检测出的一种糖蛋白。CA125蛋白是一种高分子糖蛋白，主要含半乳糖、N-乙酰氨基葡萄糖和N-乙酰氨基半乳糖链，蛋白部分富含丝氨酸，夕卜形呈环形结构，核心是2 。血浆和体液中的CA125蛋白分别与分子量约为500kD和300kD的糖蛋白结合，而具有CA125蛋白免疫活性的最小亚基为50kD。CA125蛋白存于胚胎发育中的体腔上皮细胞中，于出生后消失，但在卵巢癌细胞中又重新出现。免疫组化研究发现CA125蛋白存在于胎儿消化道上皮细胞、羊膜、成人胸膜、腹腔间皮细胞、输卵管内皮、子宫及宫颈内膜中，但成人及胎儿的卵巢上皮细胞并未发现CA125蛋白的存在。因此，CA125蛋白主要用于辅助诊断恶性浆液性卵巢癌、卵巢上皮癌，同时也是疗效考核、判断有无复发的良好指标，开发具有分泌抗CA125蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及特异性的抗CA125蛋白单克隆抗体具有重要的研究价值。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种特异性强的可分泌抗CA125蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、其分泌的单克隆抗体及相关应用。一种可分泌抗CA125蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，保藏号为CCTCC No:C201318。`上述杂交瘤细胞可应用在制备CA125蛋白检测试剂或设备领域中。一种由上述杂交瘤细胞分泌的抗CA125蛋白的单克隆抗体。上述单克隆抗体可应用在制备CA125蛋白检测试剂或设备领域中。一种CA125蛋白酶联免疫检测试剂盒，所用的抗体为上述单克隆抗体。在其中一个实施例中，所述CA125蛋白酶联免疫检测试剂盒包括由所述单克隆抗体包被的酶标板、所述单克隆抗体与辣根过氧化物酶结合物溶液、CA125蛋白标准品溶液、显色液、终止液、洗涤液及稀释液。在其中一个实施例中，所述显色液为3，3’，5，5’ -四甲基联苯胺(TMB)显色液；所述终止液为IM的硫酸溶液；所述洗涤液为含0.5wt%吐温20的0.1M pH7.4的PBS溶液；所述稀释液为含10wt%牛血清白蛋白的0.1M pH7.4的PBS溶液。一种CA125蛋白化学发光磁酶免疫测定试剂盒，所用的抗体为上述抗CA125蛋白单克隆抗体。在其中一个实施例中，所述CA125蛋白化学发光磁酶免疫测定试剂盒包括如下各组分:工作液1:辣根过氧化物酶标记的所述抗CA125蛋白单克隆抗体溶液，浓度为0.5 μ g/mL ；工作液2:生物素标记的抗CA125蛋白单克隆抗体溶液，浓度为I μ g/mL ；工作液3:偶联链霉亲和素的磁珠；Luminol化学发光底物；CA125 蛋白标准品溶液:浓度依次为 0U/mL、10U/mL、40U/mL、160U/mL、640U/mL、1280U/mL 及 5125U/mL ；洗涤液:含0.05%Tween20的浓度为0.0lM pH7.4的PBS溶液。上述可分泌抗CA125蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞命名为CA125蛋白-A6，于2013年I月24日保藏在湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学保藏中心(即中国典型培养物保藏中心)，保藏号是CCTCC No:C201318o上述杂交瘤细胞的分泌产量高，其分泌得到的抗CA125蛋白单克隆抗体具有高亲和力、高特异性等优点，可广泛应用在制备CA125蛋白的检测领域，如检测试剂或检测设备的制备领域等，在特异性、灵敏度和检测率等方面较之传统的检测方法或检测试剂具有显著的优势。附图说明图1为CA125单克隆抗体(CCTCC No:C201318)的G3000分子筛层析图谱；图2为CA125单克隆抗体(CCTCC No:C201318)电泳图，右侧为CA125单克隆抗体(CCTCC No:C201318)； 图3为CA125蛋白酶联免疫检测标准曲线；图4为CA125蛋白化学发光磁酶免疫测定标准曲线。具体实施例方式本实施方式通过采用天然CA125蛋白作为抗原，制备得到的可分泌抗CA125蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC No:C201318。该杂交瘤细胞可分泌出抗CA125蛋白的单克隆抗体。该杂交瘤细胞及其分泌的单克隆抗体可用于制备CA125蛋白的检测试剂或设备领域中。下面结合附图及具体实施例对可分泌抗CA125蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、其分泌的单克隆抗体及应用作进一步详细的说明。实施例1杂交瘤细胞的建立与抗CA125蛋白单克隆抗体的制备1.抗原免疫将纯化的天然CA125抗原(BioProcessing公司，产品编号83752000)作为抗原与弗氏完全佐剂(SIGMA公司，产品编号F5881)等体积混合，得到油状乳液。将该乳液以0.2mL的剂量皮下施给BALB/c小鼠(广州省实验动物中心，6周龄雌性，5只)背腹部位点，第一次免疫14天后腹腔增强免疫，抗原与弗氏不完全佐剂(SIGMA公司，产品编号F5506)等体积混合，增强免疫到四针后，采尾血进行效价检测，效价在3X IO3的时候大于0.5。融合前3天，用相同剂量抗原脾脏加强追加免疫，免疫方法同上。2.杂交瘤细胞的制备(I)饲养细胞的制备以BALB/c鼠腹腔巨噬细胞作饲养细胞，在融合前I天，BALB/c鼠拉颈处死，75%酒精全身浸泡5分钟，在超净台内、无菌操作下用剪刀剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用注射器腹腔注入RPMI1640基础培养液5mL，反复冲洗，回收冲洗液，lOOOrpm，离心5分钟，留沉淀，用RPMI1640筛选培养液(含HAT的RPMI1640完全培养液中)重悬，调整细胞浓度I X IO5个/mL，加入96孔板，180 u L/孔，在37°C、5%C02环境中培养过夜。(2)免疫脾细胞的制备小鼠末次免疫后第三天，在无菌条件下取出脾脏，置于平皿中，RPMI1640基础培养液冲洗一次，放于小烧杯的尼龙网上磨碎过滤，制成细胞悬液。离心，弃上清RPMI1640基础培养液重悬，如此重复三次,计数。(3)小鼠瘤细胞的制备小鼠瘤细胞经筛选后，培养至对数生长期，取两大瓶制成细胞悬液，离心，弃上清，用RPMI1640基础培养液重悬，如些重复三次，计数。(4)细胞融合及HAT选择杂交瘤将小鼠瘤细胞与免疫脾细胞混合，在50mL塑胶离心管内用RPMI1640基础培养液洗I次，1200rpm,离心8分钟。弃上清，将细胞混匀，缓慢加入lmL50%的PEG1500融合，融合I分钟后加入15mL的RPMI1640基础培养液终止细胞融合。lOOOrpm，离心5分钟。弃上清，用50mL的RPMI1640筛选培养液轻轻混悬，分至96孔细胞培养板中，在37°C、5%C02环境中培养。培养至第六天，换HT 培养液(含HT的RPMI1640完全培养液)两次。(5)抗体的检测用0.05M pH9.5碳酸缓冲溶液稀释CA125抗原，使其终浓度为60u/mL。每孔0.1mL加入96孔聚苯乙烯板，37°C孵育2小时或4°C过夜。后用含10%小牛血清或1%脱脂奶粉的0.01M pH7.4PBS溶液，0.12mL/孔，37°C孵育2小时，用于检测。重组融合后第七天，取细胞上清0.1mL于上述96孔检测板中，37°C孵育30分钟，水本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种可分泌抗CA125蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，保藏号为CCTCCNo：C201318。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：范凌云，彭亮，张翼，刘莉莉，
申请(专利权)人：深圳市菲鹏生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。