一种新的人分泌蛋白hZG16制造技术

本发明专利技术公开了一种人类新的分泌蛋白ｈＺＧ１６。本发明专利技术的分泌蛋白是一种功能非常重要的蛋白，在多细胞生物的生长、发育、细胞分化增殖、凋亡、细胞通讯、信号传导中发挥着重要作用。并且ｈＺＧ１６基因主要分布在人的肝脏及结肠组织中，并在肝癌中的表达呈现下调趋势。因此该分泌蛋白具有临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学、基因工程学、肿瘤学、细胞生物学领域。具体地，本专利技术涉及一种新的分泌蛋白hZG16蛋白及其核酸序列。本专利技术还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。
技术介绍
分泌蛋白是一类功能非常重要的蛋白，对多细胞生物的生长、发育、细胞分化增殖、凋亡、细胞通讯、信号传导中发挥着重要作用。人体中分泌蛋白占人类蛋白质组的十分之一，它们参与了信号途径、血液凝固、免疫防御、癌症发生等多种过程，如消化酶、胞外基质与血浆中的很多主要因子，以及激素、神经肽、细胞因子等都是分泌蛋白。一些分泌蛋白具有潜在的临床应用价值，并已在实际上得到了广泛的应用，如生长激素、干扰素和白细胞介素等分泌蛋白是由信号肽(signal peptide)介导，进入内质网，然后分泌到细胞外。蛋白质分子中的信号肽研究开始于20世纪60年代，这方面的工作是在研究分泌蛋白的基础上进行的，当时的研究旨在了解，在核糖体上合成的新生肽链是通过何种途径被分泌到细胞外的。德裔美国科学家布洛贝尔(G.Blobel)，因对蛋白质分子中信号肽的开创性研究，获得了1999年度诺贝尔生理学或医学奖。分泌蛋白区别于其他胞质蛋白的唯一共同的特征就是氨基末端信号肽序列。信号肽在各个蛋白中都不相同，但有一些较类似的性质。起始的甲硫氨酸后是一些多为亲水的带正电荷的残基，该区为n区，然后是7-15个残基的疏水区h区，该区富含亮氨酸、丙氨酸和缬氨酸，最后的c区包含信号肽蛋白酶的剪切位点。在剪切位点的-1和-3多为倾向为丙氨酸或其他带短侧链的氨基酸，而在-4和-6位则为有助于剪切的脯氨酸。因此针对信号肽发展了许多遗传算法来进行信号肽的分析预测。预测信号肽和蛋白质结构域近年来得到迅猛发展，这极大地归功于机器学习方法的改善和更多的序列信息来训练这些算法。这其中比较有效的模型就是神经网络模型和隐藏的马科夫模型。SignalP是目前最有效的预测信号肽和剪切位点的方法。该软件综合了神经网络模型和隐藏的马科夫模型，前者预测是否含信号肽蛋白，后者预测剪切位点。通过大量的序列样本进行训练(非同源的原核生物蛋白266个革兰氏阴性菌序列，141个革兰氏阳性菌序列；真核生物蛋白1011个非同源蛋白序列)，得到较高的准确性，真核生物准确性为78％，原核生物为89％。分泌蛋白约占人类蛋白质组的十分之一，是一类功能非常重要的蛋白，在多细胞生物的生长、发育、细胞增殖、凋亡、细胞通讯、信号传导等过程中发挥着重要作用。发现与研究新分泌蛋白是目前功能基因组学研究的热点之一。用SignalP2.0对人蛋白数据库进行信号肽预测，结合pSORT分析，初步确定候选基因。RT-PCR获得目的基因，构建到真核表达载体中使其表达，WESTERN BLOT验证生物信息学分析结果，确定基因是否表达分泌蛋白。通过上述生物信息学预测与实验验证结合的方法，获得了1个新分泌蛋白hZG16。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种新的人分泌蛋白hZG16；本专利技术的另一目的在于提供了上述新的人分泌蛋白hZG16的制备方法；本专利技术的再一目的在于提供了与上述新的人分泌蛋白hZG16特异结合的抗体。本专利技术的上述目的是通过如下技术方案来实现的本专利技术公开了一种分离的人分泌蛋白hZG16，所述分泌蛋白包含与SEQ ID NO.2所示氨基酸序列有至少70％同源性的多肽序列。优选的，所述分泌蛋白含有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列。本专利技术还公开了一种制备上述的分离的人分泌蛋白hZ616的方法，其特征在于，该方法依次包括如下步骤(a)将编码具有人分泌蛋白hZG16活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成hZG16蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸7-510位的核苷酸序列有至少70％同源性；(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成hZG16蛋白的重组细胞；(c)在适合表达hZG16蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；(d)分离出具有hZG16蛋白活性的多肽。优选的，上述步骤(a)中，所述核苷酸序列为SEQ ID NO.1中从核苷酸7-510位的核苷酸。本专利技术还公开了能与权利要求1所述的人分泌蛋白hZG16多肽特异性结合的抗体。本专利技术的分泌蛋白hZG16是一种功能非常重要的蛋白，在多细胞生物的生长、发育、细胞分化增殖、凋亡、细胞通讯、信号传导中发挥着重要作用。该分泌蛋白具有潜在的临床应用价值。附图说明图1是本专利技术实施例1的SignalP2.0软件分析SignalP-NN结果图像；图2是本专利技术实施例1的SignalP2.0软件分析SignalP-HMM结果图像；图3是本专利技术实施例1的hZG16基因及蛋白结构示意图；图4是本专利技术实施例1的序列同源性比对结果图；图5是本专利技术实施例1的hZG16基因进化树分析结果图；图6是本专利技术实施例2的hZG16基因琼脂糖凝胶电泳图；图7是本专利技术实施例3搜索genecard网站得到的hZG16芯片杂交的表达谱；图8是本专利技术实施例3搜索Gene Expression Atlas得到的hZG16在Human U95A芯片的原始杂交结果图；图9是本专利技术实施例3的人类多组织RNA印迹膜对hZG16基因的组织分布结果图；图10是本专利技术实施例3的RT-PCR与Northern印迹分析hZG16基因在肝癌及癌旁的表达变化结果图，N癌旁，C肝癌；图11是本专利技术实施例4的免疫荧光显示hZG16蛋白在细胞中的分布图像图12是本专利技术实施例4的荧光共定位分析结果图；图13是本专利技术实施例5的菌落的PCR鉴定结果图；图14是本专利技术实施例5的蛋白电泳结果图。具体实施例方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步描述。实施例1人hZG16基因生物信息学分析序列相似性比对及进化树分析，采用软件Alignment，GeneDoc，Treeview。信号肽、穿膜区域预测、亚细胞定位分析分别采用网上的共享web软件SignalP http//www.cbs.dtu.dk/services/SignalP-2.0/，SOSUIhttp//sosui.proteome.bio.tuat.ac.jp/sosuiframe0.html及PSORT http//psort.nibb.ac.jp/。功能结构域和基元(motif)预测，采用了PROSITEhttp//us.expasy.org/prosite/，InterPro Scan http//www.ebi.ac.uk/interpro/scan.html. ProfileScan，http//hits.isb-sib.ch/cgi-bin/PFSCAN以及NCBI的CDART(Conserved Domain Architecture Retrieval Tool)，http//www.ncbi.nih.gov/Structure/cdd/cdd.shtml。修饰位点分析采用了http//au.expasy.org/tools/。结果1.hZG16基因(NM 152338)在基因组上定位在16p11.2，成熟mRNA共632碱基，翻译后蛋白由167个氨基酸组成，分子量为18177Da，核酸及蛋白序列见SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2。2.利用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人分泌蛋白ｈＺＧ１６，其特征在于，所述分泌蛋白包含与ＳＥＱＩＤＮＯ．２所示氨基酸序列有至少７０％同源性的多肽序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周宇波，朱智东，朱弘，黄健，韩泽广，
申请(专利权)人：上海人类基因组研究中心，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]