一种表达猪表皮生长因子的重组嗜酸乳杆菌的构建方法及用途技术

本发明专利技术公开了一种表达猪表皮生长因子的重组嗜酸乳杆菌的构建方法及用途，根据已公开的猪表皮生长因子的基因序列及表达载体质粒特点，设计含特异酶切位点的引物；以猪下颌腺组织为材料，通过RT-PCR获得含有猪表皮生长因子基因的片段，将其与乳酸菌表达载体质粒pMG36e进行连接，获得重组质粒pMG36e-egf，通过电转化方法将该重组质粒转入嗜酸乳杆菌内，得到表达猪表皮生长因子的重组嗜酸乳杆菌，在乳链菌肽(nisin)的诱导下进行表达，并经SDS-PAGE和Western?blot分析证明目的基因得到正确表达。该重组菌用于防治腹泻的发生，改善猪的肠道健康，提高生长性能。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于畜牧兽医
，尤其涉及一种表达猪表皮生长因子的重组嗜酸乳杆菌的构建方法及其在促进猪肠道健康中的应用。
技术介绍
在当前，养猪业已成为关系国计民生的重要产业。在养猪生产中，仔猪是生长发育最快、饲料利用率最高、开发潜力最大的一个阶段，仔猪饲养的好坏直接影响猪整个饲养期的生产成绩。然而，仔猪阶段也是生存能力、生理机能最脆弱的阶段，仔猪死亡率通常占整个饲养期死亡率的70%。仔猪成活率低和生长缓慢是目前我国养猪生产中面临的主要问题，提高仔猪饲养成绩是保障养猪业快速发展的关键。动物肠道不仅是动物体内最大的消化吸收器官，是所有营养物质最终的吸收场所，同时也是体内最大的免疫器官，仔猪肠道健康发育是快速生长与高成活率的生理基础。新生仔猪由于肠道处于快速发育之中，结构与功能不完善，养分的消化吸收与免疫屏障功能有很大的局限性，难以适应营养与环境的变化，增加了饲养的困难。仔猪哺乳期间，初乳和常乳中都含有高水平的、可促进肠道发育和成熟的生长因子，如谷氨酰胺、表皮生长因子、类胰岛素生长因子和多胺等，断奶后，这些因子消失，对肠细胞生长、分化及细胞功能的发育产生不良影响。仔猪断乳后由于受营养、生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表达猪表皮生长因子基因的重组益生菌的构建方法，其特征在于包括以下步骤：（1）猪表皮生长因子基因的获得：提取猪下颌腺RNA，经过RT?PCR得到cDNA，以此cDNA为模板，设计合成含有Sac?I和Xba?I酶切位点的上下游引物P1和P2，上下游引物P1和P2分别具有猪egf基因（Gene?ID：X59516.1）的序列，采用PCR方法扩增猪egf基因片段。将所扩增的egf目的基因片段与克隆载体pMD18?T载体连接，得到重组质粒，转入大肠杆菌DH5a中，经过氨苄青霉素抗性筛选，挑取阳性克隆，并通过酶切鉴定和测序分析验证，验证正确的质粒命名为pMD18T?egf，重组质粒序列测定表明该质粒具...

【技术特征摘要】
1.一种表达猪表皮生长因子基因的重组益生菌的构建方法，其特征在于包括以下步骤: (I)猪表皮生长因子基因的获得:提取猪下颌腺RNA，经过RT-PCR得到cDNA，以此cDNA为模板，设计合成含有Sac I和Xba I酶切位点的上下游引物Pl和P2，上下游引物Pl和P2分别具有猪egf基因(Gene ID:X59516.1)的序列，采用PCR方法扩增猪egf基因片段。将所扩增的egf目的基因片段与克隆载体PMD18-T载体连接，得到重组质粒，转入大肠杆菌DH5a中，经过氨苄青霉素抗性筛选，挑取阳性克隆，并通过酶切鉴定和测序分析验证，验证正确的质粒命名为pMD18T_egf，重组质粒序列测定表明该质粒具有猪egf的基因序列。(2 )重组表达载体pMG36e-egf的构建:将乳酸菌表达载体pMG36e和克隆质粒pMD18T-egf用限制性内切酶Sac I和Xba I进行双酶切，纯化回收双酶切的线性化的pMG36e载体片...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯永清，吴涛，窦茂鑫，赵迪，丁斌鹰，
申请(专利权)人：武汉工业学院，武汉泛华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：