一种表达猪小肠三叶因子的重组嗜酸乳杆菌的构建方法及用途技术

本发明专利技术公开了一种表达猪小肠三叶因子基因的重组嗜酸乳杆菌的构建方法及用途，根据已公开的猪小肠三叶因子的基因序列及表达载体质粒特点，设计含特异酶切位点的引物；以猪小肠黏膜为材料，通过RT-PCR获得含有猪小肠三叶因子基因的片段，将其与乳酸菌表达载体质粒pMG36e进行连接，获得重组质粒pMG36e-itf3，通过电转化方法将该重组质粒转入嗜酸乳杆菌内，得到表达猪小肠三叶因子的重组嗜酸乳杆菌，在乳链菌肽(nisin)的诱导下进行表达，并经SDS-PAGE和Western?blot分析证明目的基因得到正确表达。该重组菌用于防治腹泻的发生，改善猪的肠道健康，提高生长性能。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种表达猪小肠三叶因子基因的重组嗜酸乳杆菌的构建方法，其特征在于包括以下步骤：（1）猪小肠三叶因子基因的获得：提取猪小肠黏膜RNA，经过反转录得到cDNA，以此cDNA为模板，设计合成含有Xma?I和Sph?I酶切位点的上下游引物P1和P2，上下游引物P1和P2分别具有猪itf3基因（Gene?ID：?AM283538.1）的序列，采用PCR方法扩增猪itf3基因片段。将所扩增的itf3目的基因片段与克隆载体pMD18T载体连接，得到重组质粒，转入大肠杆菌DH5a中，经过氨苄青霉素抗性筛选，挑取阳性克隆，并通过酶切鉴定和测序分析验证，验证正确的质粒命名为pMD18T?itf3，重组质粒序列测定...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：侯永清，吴涛，窦茂鑫，赵迪，丁斌鹰，
申请(专利权)人：武汉工业学院，
类型：发明
国别省市：