BCL10基因突变的快速检测方法技术

本发明专利技术提供了一种BCL10基因突变的快速检测方法，其包括如下实现步骤：设计一对引物将包括待突变位点在内的基因序列扩增出来作为野生型模板；再设计引物在将待突变位点改变成所需碱基的同时，将上述DNA片段在待突变点分为两段，且在待突变位点附近有少量重复序列；最后利用部分重复的两个DNA片段混合起来作为模板，而利用最开始的那对引物将两个小片段连接起来，其产物即含有所述的突变点；不同比例混合上述两种片段，用HRM方法进行区分；与其它方法相比，本发明专利技术方法具有高特异性、高灵敏度与方便快捷的优点；而且通量更高，单次成本更低。

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术涉及生物技术和医学领域，尤其是分子生物学，分子诊断，实时定量PCR技术。
技术介绍
：Bcl10是一种含有胱冬肽酶募集结构域（Caspase Recruitment Domain,CARD）的细胞凋亡调节因子,是从粘膜相关淋巴组织（Mucosa-associatedLymphoid tissue,MALT）淋巴瘤的染色体转位中发现的；最初作为低度B细胞淋巴瘤（B-cell Lymphoma）相关基因得到鉴定的，Bcl10基因位于多个抑癌基因聚集的染色体1P22位置，而染色体转位使整个bc110基因在染色体上受到调节因子的控制而导致其超量表达。BCL10、CARMA1、和MALT1一道为淋巴细胞抗原受体介导的NF-κB激活过程所必需，3种信号蛋白分子,在这条信号传导通路中互相协调，具有调节细胞凋亡和NF-κB信号转导等活性（3）。如果NF-κB家族成员有基因缺陷或其上游的信号分子功能缺陷，则可能引起免疫缺陷性疾病；而异常的NF-κB持续活化也可导致细胞过度增生、分化障<本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种BCL10基因突变的快速检测方法，其特征在于，其包括如下实现步骤：？设计一对引物将包括待突变位点在内的基因序列扩增出来作为野生型模板;？再设计引物在将待突变位点改变成所需碱基的同时，将上述DNA片段在待突变点分为两段，且在待突变位点附近有少量重复序列；？最后利用部分重复的DNA片段混合起来作为模板，而利用最开始的那对引物将两个小片段连接起来，其产物即含有所述的突变点；？不同比例混合上述两种片段，用HRM方法进行区分。

【技术特征摘要】
1.一种BCL10基因突变的快速检测方法，其特征在于，其包括如下实现步骤： 
设计一对引物将包括待突变位点在内的基因序列扩增出来作为野生型模板; 
再设计引物在将待突变位点改变成所需碱基的同时，将上述DNA片段在待突变点分为两段，且在待突变位点附近有少量重复序列； 
最后利用部分重复的DNA片段混合起来作为模板，而利用最开始的那对引物将两个小片段连接起来，其产物即含有所述的突变点； 
不同比例混合上述两种片段，用HRM方法进行区分。 
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述PCR产物的高分辨率熔解曲线基于HRM的基因分型-Tm的不同，PCR产物的Tm取决于GC含量。 
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:所述纯合子包括野生型纯合子或突变纯合子样品的扩增产物进行熔解曲线，得到相似峰形的熔解曲线；杂合子样品的扩增产物进行熔解曲线，得到不同峰形的熔解曲线。 
4.根据权利要求1所述的一种BCL10基因突变的快速检测方法，其特征在于，其包括如下步骤： 
样本处理：取外周血2ml于EDTA抗凝管中，轻柔地颠倒混匀，4℃保存；DNA提取：取200μL抗凝血用试剂盒提取DNA，采用电泳凝胶成像对DNA纯度和浓度作检测； 
qPCR-HRM检测，包括： 
结果分析及判定：通过HRM方法，以阳性对照孔为分界线，样本孔与基线差异大...

【专利技术属性】
技术研发人员：王明，范少安，
申请(专利权)人：上海赛安生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：