芝麻栽培种与Sesamum radiatum野生种远缘杂交后代的分子鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种芝麻栽培种与Sesame?radiatum野生种远缘杂交后代的分子鉴定方法，属生物技术领域。通过提取栽培种（Sesame?indicum?L.,2n=26）、野生种（Sesame?radiatum,2n=64）及杂交后代F1的基因组DNA，进行PCR扩增和凝胶电泳检测，根据是否能够同时扩增出亲本的特异性条带判定远缘杂交F1代的真假。本发明专利技术建立的芝麻远缘杂交后代的分子鉴定方法，解决了芝麻远缘杂交育种研究过程中的远缘杂种鉴定周期长、准确率低等难题，填补了我国芝麻远缘杂交育种技术的空白。利用该方法可以高效快速地鉴定芝麻远缘杂交后代F1，为芝麻抗病新品种育种奠定了材料和技术基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物杂交后代的分子鉴定方法，特别是涉及一种芝麻栽培种（2n=26）与野生种（Sesame radiatum，2n=64）远缘杂交后代的分子鉴定方法，属于生物
 
技术介绍
芝麻（Sesame indicumL.，2n=26）属胡麻科胡麻属，是世界上最古老的特色油料作物之一。芝麻在我国已有三千多年的栽培历史，因品质优良，在国际生产和贸易中占有重要地位。然而，由于芝麻抗病耐渍性较差，易受环境条件的影响，产量的稳产性不佳。近二十年来，开展高产稳产抗病抗逆新品种选育一直是我国芝麻遗传育种的一项重点任务。 芝麻野生种（Sesame radiatum，2n=64）具有较好的抗病抗逆特性，将野生种的抗病抗逆特性转入栽培种，是提高芝麻品种抗性特征的重要技术途径。但是由于芝麻远缘杂交不具有亲和性，后代几乎不能自交结实，目前只能采用幼胚拯救培养、组培苗移栽方式获得远缘杂交后代。在远缘杂交后代鉴定方面，受研究技术限制，目前仅采用外观形态、生物学等鉴定方法判断芝麻远缘杂交F1代的真伪。研究发现，与实生苗不同的是，芝麻远缘杂交后代组培苗之间在外观形态本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测芝麻栽培种与Sesame？radiatum野生种远缘杂交后代的的SSR引物，包括：引物对HS209正向引物序列：5’？GCAAGAAGCCGACATGTTTA？3’（Tm=53.35℃）反向引物序列：5’？ACTCCAATTCCTCCACCAAG？3’（Tm=55.4℃）。

【技术特征摘要】
1.检测芝麻栽培种与Sesame radiatum野生种远缘杂交后代的的SSR引物，包括：
引物对HS209
正向引物序列：5’-GCAAGAAGCCGACATGTTTA-3’（Tm=53.35℃）
反向引物序列：5’-ACTCCAATTCCTCCACCAAG-3’（Tm=55.4℃）。
2.一种如权利要求1所述的引物用于芝麻栽培种与Sesame radiatum野生种远缘杂交
后代的分子鉴定方法，其特征在于，具体步骤如下：
（1）挑选饱满健康的芝麻栽培种（Sesame indicum L.,2n=26）与野生种（Sesame 
radiatum,2n=64）种子，6月播种后于7月下旬植株进入花期，进行人工授粉杂交，采用
组织培养方法对杂交后代幼胚进行培养，获得远缘杂交F1后代；
（2）提取步骤（1）中芝麻栽培种（Sesame indicum L.,2n=26）、野生种（Sesame radiatum,
2n=64）及杂交后代F1基因组DNA，作为模板备用；
（3）将步骤（2）提取的DNA模板应用于PCR反应体系，运行PCR扩增程序，在引
物对HS209的引导下，得到PCR反应产物；
（4）将步骤（3）的PCR反应产物进行凝胶电泳检测，检测结果有栽培种特异性条带
210bp和野生种特异性条带200bp、230bp的为真杂种；其余则为假杂种。
3.根据权利要求2所述的分子鉴定方法，其特征在于，所述的基因组DNA的提取方
法：取植株叶片，加入预冷的提取缓冲液，研磨，4℃离心，弃上清，于沉淀中加入预热
的裂解缓冲液，65℃水浴，加入氯仿/异戊醇混合液，混匀，15℃离心，取上清，加预冷的
异丙醇，混匀，静置，离心，弃上清，于沉淀...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海洋，苗红梅，张体德，魏利斌，李春，琚铭，王慧丽，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：