一株马立克病病毒双基因编辑缺失疫苗株SD01ΔmeqΔM11及构建和应用制造技术

技术编号:42729276 阅读:122 留言:0更新日期:2024-09-13 12:13
本发明专利技术提供了一株马立克病病毒meq和miR‑M11双基因编辑缺失的疫苗候选毒株SD01ΔmeqΔM11及构建和应用。该疫苗毒株保藏编号为:CGMCC NO.45863。本发明专利技术提供的SD01ΔmeqΔM11疫苗毒株的亲本毒株为MDV特超强中国变异株SDCW01。将亲本毒株SDCW01体外传代后,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,分别在SDCW01基因组的两个meq等位和两个miR‑M11等位基因上各缺失925bp和304bp大小的片段。通过PCR鉴定、基因克隆测序、RT‑qPCR分析、IFA鉴定等,证实SD01ΔmeqΔM11毒株meq和miR‑M11双等位基因完全缺失且传代稳定性良好。SPF鸡免疫攻毒保护实验显示,SQ01ΔmeqΔM11具有极好的免疫保护性,对当前流行的HV‑MDV中国变异株HNSQ01的免疫保护指数高达100%。本发明专利技术构建的SD01ΔmeqΔM11毒株不仅可作为MD基因缺失的疫苗候选毒株,还可用于后续MD新型基因工程疫苗的开发和利用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一株基于马立克病病毒特超强中国变异株的meq和mir-m11双基因编辑缺失的md疫苗候选毒株sd01δmeqδm11及构建和应用,属于动物病毒学领域。


技术介绍

1、马立克病(md)是因早期感染马立克病病毒(mdv)而诱发的一种最重要的家禽免疫抑制病与肿瘤病,每年给全球养禽业造成巨大经济损失。与md有关的家禽疱疹病毒,包括三种不同血清型,分别为血清ⅰ型(mdv-1)即禽疱疹病毒2型(gaahv-2)、血清ⅱ型(mdv-2)即禽疱疹病毒3型(gaahv-3)和血清ⅲ型(mdv-3)即火鸡疱疹病毒(hvt)/(meahv-1)。其中只有mdv-1分离株具有致病和致瘤性。作为首个成功应用疫苗控制的病毒性肿瘤病,md曾在上世纪末的数十年中得到了良好控制。但md疫苗的长期使用及超强的免疫压力,导致mdv流行毒株持续进化及毒力不断增强。近年来,一些特超强mdv(vv+mdv)毒株,特别是最近从md疫苗免疫鸡群发病病例中分离到的特超强毒mdv变异株(hv-mdv),被证实已全面突破了当前广泛使用的经典md疫苗的免疫保护,很可能是导致近期全球养禽业md病例频本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一株马立克病病毒meq和miR-M11双基因编辑缺失疫苗候选毒株SD01ΔmeqΔM11,其特征在于,所述马立克病病毒meq和miR-M11双基因编辑缺失疫苗候选毒株为SD01ΔmeqΔM11,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNO.45863。

2.如权利要求1所述的马立克病病毒meq和miR-M11双基因编辑缺失疫苗候选毒株SD01ΔmeqΔM11,其特征在于,所述疫苗候选毒株SD01ΔmeqΔM11的亲本毒株为分离自中国鸡群流行的特超强马立克病病毒变异株SDCW01,该亲本毒株的全基因组核苷酸序列全长为175246bp,如SEQ...

【技术特征摘要】

1.一株马立克病病毒meq和mir-m11双基因编辑缺失疫苗候选毒株sd01δmeqδm11,其特征在于,所述马立克病病毒meq和mir-m11双基因编辑缺失疫苗候选毒株为sd01δmeqδm11,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为cgmccno.45863。

2.如权利要求1所述的马立克病病毒meq和mir-m11双基因编辑缺失疫苗候选毒株sd01δmeqδm11,其特征在于,所述疫苗候选毒株sd01δmeqδm11的亲本毒株为分离自中国鸡群流行的特超强马立克病病毒变异株sdcw01,该亲本毒株的全基因组核苷酸序列全长为175246bp,如seq id no.1所示。

3.如权利要求1所述的马立克病病毒meq和mir-m11双基因编辑缺失疫苗候选毒株sd01δmeqδm11,其特征在于,所述疫苗候选毒株sd01δmeqδm11是以马立克病病毒特超强中国变异株sdcw01为亲本毒株,将其基因组中的两个meq等位基因分别编辑缺失一个长度同为925bp的片段,基因缺失的分子标记位点分别为:第4515~5440位和133626~134551位;在此基础上又将基因组中的两个mir-m11等位基因分别编辑缺失一个长度为304bp的片段,基因缺失的分子标记位...

【专利技术属性】
技术研发人员:罗俊滕蔓张卓罗琴郑鹿平贾斌程娜赵东邢广旭柴书军
申请(专利权)人:河南省农业科学院
类型:发明
国别省市:

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