本发明专利技术公开了miR-320a及其反义核苷酸分别在动脉粥样硬化性心脑血管疾病的风险评估/诊断和预防及治疗动脉粥样硬化性心脑血管疾病中的用途。本发明专利技术人通过大量的实验研究证明miR-320a在动脉粥样硬化型心脑血管疾病(动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗死和脑卒中)及冠心病的高危人群中血浆(或血清)水平改变(增高)并有明显致动脉粥样硬化、炎症状态和血脂代谢紊乱作用；证明miR-320a的其反义核苷酸anti-miR-320a对上述动脉粥样硬化性心脑血管疾病及其相关的紊乱状态有明显减轻和防治作用。最终确定(1)将其作为一种新型的药物作用靶点，可能通过使用反义核苷酸anti-miR-320a预防和治疗动脉粥样硬化性心脑血管疾病(如动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗死和脑卒中等)；(2)外周血液miR-320a水平可以作为一种新的生物标志物，检测它的表达水平可用来预测和评估动脉粥样硬化性心血管系统疾病的风险或协助诊断已经存在的动脉粥样硬化性心血管疾病。还可以通过荧光定量PCR技术检测患者外周血液中的miR-320a的表达水平，用于协助对上述心血管疾病的诊断。
【技术实现步骤摘要】
一、
本专利技术涉及一种内源性的非编码小RNA的新医药用途，更具体地说涉及microRNA-320(hsa-miR-320a)及其反义核苷酸序列hsa-anti-miR-320a在动脉粥样硬化性心脑血管疾病的风险评估和动脉粥样硬化性心脑血管疾病的预防和治疗中的用途，属于心血管疾病的诊断、预防和治疗领域。 二、
技术介绍
动脉粥样硬化是引起多种临床心血管事件的病理生理基础之一，并已成为致死率和致残率首要病因。已有的研究表明，动脉粥样硬化是多因素导致的，由多种细胞共同参与的炎症免疫过程，在炎症等因素作用下，动脉粥样硬化斑块变得不稳定，血管急性闭塞导致急性心梗等事件。脂质沉积于各类血管腔内是动脉粥样硬化最显著的病理改变，然而其具体病理生理机制和分子信号网络还未被完全认识和阐明。到目前为止，以HMG-CoA还原酶为靶点的他汀类降脂物是最成功的抗动脉粥样硬化药物，但对部分患者无效或效果不理想，新的治疗措施亟待发掘；另一方面，动脉粥样硬化的病因和危险因素并未完全阐明，因此需要寻找新的危险因素和采用更加有效的风险评估方法。 微小RNA(microRNA，miRNA)是一类新发现的在多种生物进程中具有重要调控作用的非编码RNA，是来源于内源性发夹结构转录本的长度大约为22个核苷酸的单链RNAs。通常miRNA作为引导分子，与靶mRNA的3’UTR碱基互补结合，介导基因转录后调控。大多数情况下，miRNA与靶mRNA结合后将抑制蛋白质翻译并激活核酸外切酶降解mRNA，若miRNA与靶mRNA高度互补结合则可激活核酸内切酶活性。在复杂的病理生理过程中，miRNA或miRNAs簇协同参与多级调控是miRNA重要的生物学特征之一；也是针对miRNA的应用治疗的理论基础之一。与传统的单靶点药物治疗相比，miRNA治疗可以在单个核苷酸分子靶点治疗的情况下，从多个水平调控疾病病理生理状态，达到更有效的治疗效果。 已有研究表明miRNA在细胞增殖、凋亡、炎症反应、脂质代谢和免疫应答等多种与动脉粥样硬化密切相关的病理生理过程中发挥重要作用。且RNA干扰技术作为具有突破性临床应用前景的生物技术，从出现开始的短短数年间就有多个产品进入临床试验，获得了巨大的成功。但是否存在一类miRNAs在动脉粥样硬化发生和发展的关键环节或共同通路中有着重 要的调控作用，通过干预这类miRNA能为动脉粥样硬化的治疗提供新的策略仍是对该领域科研人员的挑战。有研究者发现miR-320参与急性心肌梗死的病理生理过程(Circulation.2009；119(17)：2357-66)，但没有对具体亚型和miR-320对炎症反应、脂质代谢及动脉粥样硬化的病理生理过程的影响进行深入的研究。而本专利技术则在申请人的原创基础工作上进一步确定了miR-320a亚型参与炎症反应、脂质代谢及动脉粥样硬化形成和发展的致病作用和作用机制；确定了其作为动脉粥样硬化性疾病预测中的作用；并研究确定了miR-320a的反义序列anti-miR-320a作为治疗药物的前景，在预防和治疗动脉粥样硬化型心血管疾病中的作用。 三、
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有理论和技术的不足，确定在动脉粥样硬化、冠心病和急性心肌梗死等动脉粥样硬化性心脑血管疾病中起关键作用的miRNA的亚型种类。 本专利技术人通过大量的实验发现，在动脉粥样硬化、冠心病、急性心肌梗死等心血管疾病患者及有心血管疾病危险因素但还未患冠心病的高危人群外周血中miRNA-320a表达上调。同时，本专利技术人发现在动脉粥样硬化小鼠主动脉中miR-320a显著高表达。本专利技术人用携带hsa-miRNA-320a的表达载体pSilencer-miR-320a，在动脉粥样硬化模型小鼠中高表达miR-320a，结果发现，miRNA-320a过表达可以明显加重主动脉脂质沉积、炎症反应，促进动脉粥样硬化的发生发展。另一方面，本专利技术人根据hsa-miR-320a碱基序列，设计并合成了表达反义互补的序列anti-hsa-miR-320a，并成功的插入真核表达载体中构建成重组质粒pSilencer-anti-miR-320a，在动脉粥样硬化小鼠中过表达anti-miR-320a，可以逆转上述的病理生理过程。 具体的，本专利技术的第一个目的是提供动脉粥样硬化患者及有心血管疾病危险因素但还未患冠心病的高危人群的外周血miRNA表达谱，其中miRNA-320a显著的升高，这意味着miRNA可作为一种早期诊断和预测动脉粥样硬化性疾病的生物标志物。 本专利技术的第二个目的是在第一个目的的基础上，本专利技术人通过实验确证miRNA-320a的反义核苷酸anti-miR-320a对动脉粥样硬化具有保护作用，anti-miR-320a可成为一种预防和治疗动脉粥样硬化性心脑血管疾病包括动脉粥样硬化、冠心病和急性心肌梗死、脑中风的药物。 四、附图说明摘要附图说明：十种微小RNA(microRNA，miRNA)在冠心病患者、冠心病高危人群和正 常对照人群血浆中的相对水平(*表示与对照组相比，p＜0.05；**表示与对照组相比，p＜0.01)。 说明书附图说明：从下面给出的说明结合附图，本专利技术的上面和其他目的和特征将变得明了。其中： 图1.动脉粥样硬化患者外周血miRNA筛查结果；图1A为采用探针法微阵列芯片筛查结果：微阵列芯片检测急性心梗患者、动脉粥样硬化患者和正常对照人群血浆中的miRNA表达谱(绿色表示与对照组相比表达下调；红色表示与对照组相比表达上调)，图1B为采用Real-time PCR法验证结果：十种微小RNA(microRNA，miRNA)在冠心病患者、冠心病高危人群和正常对照人群血浆中的相对水平(＊表示与对照组相比，p＜0.05；＊＊表示与对照组相比，p＜0.01)。 图2.不同处理组别的动脉粥样硬化小鼠主动脉中miR-320a的表达情况(wt：野生型小鼠；ApoE-/-：动脉粥样硬化小鼠；＊＊表示与相同背景对照组小鼠相比，p＜0.01；##表示与未处理野生型小鼠相比，p＜0.01)。 图3.不同处理组别的动脉粥样硬化小鼠外周血血脂水平检测结果(wt：野生型小鼠；ApoE-/-：动脉粥样硬化小鼠；＊表示与相同背景对照组小鼠相比，p＜0.05；#表示与未处理野生型小鼠相比，p＜0.05)；图3A为甘油三酯水平；图3B为胆固醇水平；图3C为高密度脂蛋白水平；图3D为低密度脂蛋白水平。 图4.不同处理组别的动脉粥样硬化小鼠血浆炎症因子水平检测结果(wt：野生型小鼠；ApoE-/-：动脉粥样硬化小鼠；＊＊表示与相同背景对照组小鼠相比，p＜0.01；##表示与未处理野生型小鼠相比，p＜0.01)。图4A为IL-6；图4B为MCP-1；图4C为slCAM；图4D为pSelectin；图4E为TNF-alpha；图4F为fibrinogen。 图5.不同处理组别的动脉粥样硬化小鼠主动脉斑块检测结果(wt：野生型小鼠；ApoE-/-：动脉粥样硬化小鼠；＊＊表示与相同背景对照组小鼠相比，p＜0.01；##表示与未处理野生型小鼠相比，p本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种包含Sequence？ID？No.1所示的核酸序列的，用于诊断或者评估动脉粥样硬化性心脑血管疾病患病风险的试剂盒。
【技术特征摘要】
1.一种包含Sequence ID No.1所示的核酸序列的，用于诊断或者评估动脉粥样硬化性
心脑血管疾病患病风险的试剂盒。
2.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的心脑血管疾病包括动脉粥样硬化、
冠心病、急性心肌梗死和动脉粥样硬化性脑卒中等动脉粥样硬化性心脑血管疾病。
3.一种预防或治疗心血管疾病的药物组合物，由有效量的权利要求1所述的核酸序列和
药学上可接受的载体或辅料组成。...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪道文，陈琛，杨盛兰，王峰，龙光文，
申请(专利权)人：汪道文，陈琛，杨盛兰，
类型：发明
国别省市：
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