一种创建金线莲多倍体资源的方法技术

本发明专利技术公开了一种创建金线莲多倍体资源的方法，所述的方法具体为：以金线莲为母本，血叶兰为父本，通过属间远缘杂交、杂种群体构建、2n配子杂种后代的鉴定、2n配子杂种后代的筛选以及2n配子杂种后代的自交后获得金线莲多倍体植株。本发明专利技术的目的是提供一种创建金线莲多倍体资源的方法，该方法采用金线莲为母本，血叶兰为父本进行杂交可以获得在较短的周期内获得金线莲多倍体资源，其操作性强、效率离、成本低等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及作物遗传育种
，尤其涉及一种创建金线莲多倍体资源的方法。
技术介绍
金线莲(Anoectochilusroxburghii)即花叶开唇兰，是兰科开唇兰属的一种多年生草本植物，主要分布于福建、浙江、广西、江西和台湾等地，以福建、台湾为主产地。金线莲是我国传统珍贵药材，有清凉解毒，滋阴降火，消炎止痛等功效，常被用于糖尿病、高血脂、肝炎等慢性疾病的治疗，有“药王”、“金草”等美誉。此外，金线莲株型小巧，叶型优美，叶脉金黄色或白色呈网状排列，具有极高的观赏价值。近年来，由于市场供不应求，人们过度采挖，环境恶化，金线莲自然资源日趋枯竭。目前，现有的金线莲均为二倍体，生长缓慢，株高仅5～10cm,产量很低，药效成分更低。植物多倍体化后根、茎、叶等营养器官变大，次生代谢物含量提高，因此培育多倍体金线莲是提高金线莲药材产量的途径之一。植物多倍体的获得可通过物理、化学和生物学的方法创建。与传统的物理和化学法相比，利用生物学的2n配子途径创建多倍体具有独特的优势，不仅可直接获得三倍体、四倍体等多倍体资源，还可传递亲本更高的杂合性并能克服杂种不育。2n配子的发生即可自然发生，也可人工诱导。目前，人工诱导2n配子发生的方法主要有温度激变、气体诱变、电离辐射等物理法以及秋水仙素、安磺灵、氟乐灵、咖啡碱等化学诱变法。由于物理、化学诱导2n配子发生存在2n配子亲和力低下、诱导率低，效率不稳定等问题，物理、化学法诱导2n配子并未能有效地应用于育种实践。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种创建金线莲多倍体资源的方法，该方法采用金线莲为母本，血叶兰为父本进行杂交可以获得在较短的周期内获得金线莲多倍体资源，其操作性强、效率离、成本低等特点。本专利技术的技术方案为：一种创建金线莲多倍体资源的方法，所述的方法具体为：以金线莲为母本，血叶兰为父本，通过属间远缘杂交、杂种群体构建、2n配子杂种后代的鉴定、2n配子杂种后代的筛选以及2n配子杂种后代的自交后获得金线莲多倍体植株。在上述的创建金线莲多倍体资源的方法中，所述的属间远缘杂交的具体步骤为：待母本和父本开花后，取出金线莲花朵中的花粉块，将血叶兰的花粉块授于金线莲的蕊腔中。在上述的创建金线莲多倍体资源的方法中，杂种群体构建的具体方法为：采收经过属间远缘杂交获得的成熟果实的种子进行培养，获得第一试管苗，将第一试管苗移栽后栽培至植株开花。在上述的创建金线莲多倍体资源的方法中，所述的经过属间远缘杂交获得的成熟果实的种子进行培养获得第一试管苗的具体方法为：将种子均匀撒于种子萌发培养基中，在25～28℃条件进行暗培养直至种子萌发。当种子苗长至1～2cm高时转接至壮苗培养基中，在培养温度为25～28℃，光照强度为1500～2000lx条件下进行生根壮苗培养，获得1～2cm高的第一试管苗。在上述的创建金线莲多倍体资源的方法中，2n配子杂种后代的鉴定的具体方法为：鉴定经过杂种群体构建得到的植株的花朵的成熟花粉，统计2n花粉的发生频率。在上述的创建金线莲多倍体资源的方法中，2n配子杂种后代的筛选的具体方法为：对于2n花粉发生率大于1％的植株分盆栽培获得2n花粉发生率持续至少2年大于1％的植株确定为2n配子杂种后代。在上述的创建金线莲多倍体资源的方法中，2n配子杂种后代自交后还包括将2n配子杂种后代自交后得到的成熟果实中的种子进行培养获得第二试管苗，筛选获得金线莲多倍体植株。在上述的创建金线莲多倍体资源的方法中，所述的将2n配子杂种后代自交后得到的成熟果实中的种子进行培养获得第二试管苗的具体方法为：将2n配子杂种后代自交后得到的成熟果实中的种子撒于种子萌发培养基中，在25～28℃条件进行暗培养直至种子萌发，当种子苗长至1～2cm高时转接至壮苗培养基中，在培养温度为25～28℃，光照强度为1500～2000lx条件下进行生根壮苗培养，待第二试管苗长至5～8cm并具有2条以上根时，将培养瓶盖子打开在室外无直射光的地方放置3～5天后取出第二试管苗。在上述的创建金线莲多倍体资源的方法中，从成熟果实中获取种子的过程中，包括对对成熟果实进行消毒处理，所述的消毒处理的方法具体为：成熟果实先用自来水冲洗10～20min后，用75％的乙醇浸泡20～40s后置于0.1vol％的升汞溶液中消毒15～30min，无菌水冲洗3～5次晾干后备用。在上述的创建金线莲多倍体资源的方法中，所述的种子萌发培养基为：1/2MS、0.1～1.0mg/LNAA、20～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L琼脂、50～100ml/L椰子汁，pH为5.4～5.8；所述的壮苗培养基为：0.5～2.0g/L花宝1号、0.1～1.0mg/LNAA、20～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L琼脂、50～100g/L香蕉汁、0.2～0.5g/L活性炭，pH为5.4～5.8。需要说明的是：50～100g/L香蕉汁是指在1L培养基中，含有50-100g去皮香蕉。50～100ml/L椰子汁是指1L培养基中，含有50-100ml天然椰汁或与天然椰汁浓度相同或相近的椰汁。本专利技术的有益效果如下：本专利技术利用金线莲(Anoectochilusroxburghii)×血叶兰(Ludisiadiscolor)进行属间远缘杂交产生2n配子杂种后代的方法，通过亲本选配、远缘杂交、杂种群体构建、2n配子杂种后代的鉴定等步骤，实现了金线莲多倍体资源的创建，从而实现了本专利技术的目的。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制。本专利技术的创建金线莲多倍体资源的方法，包括以下的工艺步骤：(1)亲本选配：在温室中选取生长健壮的金线莲(Anoectochilusroxburghii)作母本，血叶兰(Ludisiadiscolor)作为父本。(2)远缘杂交：将步骤(1)的亲本进行精心栽培管理，待亲本开花时用镊子取出金线莲当天开花花朵中的花粉块，将血叶兰的花粉块授于金线莲的蕊腔中。(3)杂种群体构建：采收步骤(2)远缘杂交获得的成熟果实经消毒后用解剖刀纵向切开果实，将种子均匀撒于种子萌发培养基中，在25～28℃条件进行暗培养直至种子萌发。当种子苗长至1～2cm高时转接至壮苗培养基中，在培养温度为25～28℃，光照强度为1500～2000lx条件下进行生根壮苗培养。待试管苗长至5～8cm并具有2条以上根时，将培养瓶盖子打开在室外无直射光的地方放置3～5天后取出试管苗移栽于体积比为2:2:1的树皮、兰石、泥岩的混合基质中，试管苗移栽后精心管理直至植株开花。(4)2n配子的鉴定：待步骤(3)的植株开花后，采集植株新鲜成熟的花粉，采用直接压片法制片后于光学显微镜下观察2n花粉，统计2n花粉的发生频率。(5)2n配子杂种后代的筛选：对经步骤(4)鉴定的2n花粉发生率大于1％的植株进行分盆栽培，并经两年以上重复鉴定，筛选出发生率高且稳定的植株即为2n配子杂种后代。(6)2n配子杂种后代自交：对步骤(5)获得的2n配子杂种后代进行精心栽培管理，待植株开花后使其自然授粉。(7)多倍体资源的获得：采收步骤(6)自交获得的成熟果实经消毒后用解剖刀纵向切开果实，将种子均匀撒于种子萌发培养基中，在25～28℃条件进行暗培养直至种子萌发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种创建金线莲多倍体资源的方法，其特征在于：所述的方法具体为：以金线莲为母本，血叶兰为父本，通过属间远缘杂交、杂种群体构建、2n配子杂种后代的鉴定、2n配子杂种后代的筛选以及2n配子杂种后代的自交后获得金线莲多倍体植株。

【技术特征摘要】
1.一种创建金线莲多倍体资源的方法，其特征在于：所述的方法具体为：以金线莲为母本，血叶兰为父本，通过属间远缘杂交、杂种群体构建、2n配子杂种后代的鉴定、2n配子杂种后代的筛选以及2n配子杂种后代的自交后获得金线莲多倍体植株。2.根据权利要求1所述的创建金线莲多倍体资源的方法，其特征在于，所述的属间远缘杂交的具体步骤为：待母本和父本开花后，取出金线莲花朵中的花粉块，将血叶兰的花粉块授于金线莲的蕊腔中。3.根据权利要求2所述的创建金线莲多倍体资源的方法，其特征在于，杂种群体构建的具体方法为：采收经过属间远缘杂交获得的成熟果实的种子进行培养，获得第一试管苗，将第一试管苗移栽后栽培至植株开花。4.根据权利要求3所述的创建金线莲多倍体资源的方法，其特征在于，所述的经过属间远缘杂交获得的成熟果实的种子进行培养获得第一试管苗的具体方法为：将种子均匀撒于种子萌发培养基中，在25～28℃条件进行暗培养直至种子萌发。当种子苗长至1～2cm高时转接至壮苗培养基中，在培养温度为25～28℃，光照强度为1500～2000lx条件下进行生根壮苗培养，获得1～2cm高的第一试管苗。5.根据权利要求4所述的创建金线莲多倍体资源的方法，其特征在于，2n配子杂种后代的鉴定的具体方法为：鉴定经过杂种群体构建得到的植株的花朵的成熟花粉，统计2n花粉的发生频率。6.根据权利要求5所述的创建金线莲多倍体资源的方法，其特征在于，2n配子杂种后代的筛选的具体方法为：对于2n花粉发生率大于1％的植株分盆栽培获得2n花粉发生率持续至少2年大于1％的植株确定为2n配子杂种后代。7.根据权利要求6所述的创建金线莲多倍体资源的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁钧淞，杨业容，莫昭展，韦敏，
申请(专利权)人：玉林师范学院，
类型：发明
国别省市：广西;45