一种快速检测替米考星的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测替米考星的方法，包括以下步骤：步骤1：取样品加入到缓冲溶液中，融入到光化学发光体系中，再用电化学发光分析系统检测体系的发光强度，与阴性和阳性对照组相比较，若体系的发光强度发生了猝灭现象，且猝灭效率在5%以上，则待检测样品中含有替米考星；经过漩涡混合器混合处理后再经过离心处理，取离心处理后的上清液少量；步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2～4分钟。本发明专利技术快速检测替米考星的方法大大简化了检测步骤，降低了操作难度。

A rapid method for the detection of DNA stars

The invention discloses a method for rapid detection of tilmicosin method comprises the following steps: Step 1: the sample is added to the buffer solution, into the photochemical luminescence system, and electrochemical luminescence intensity analysis system of detection system, compared with the negative control group and positive control group, if the luminescence intensity of the system occurred quenching, and the quenching efficiency is more than 5%, tilmicosin were detected in samples containing; after treatment and then mixed vortex mixer after centrifugal treatment, after the treatment of a small amount of supernatant was centrifuged; step 2: the supernatant is added into the SLE column after standing for 2 to 4 minutes. The method of the invention rapidly detects the star of the test star, greatly simplifies the detection step and reduces the operation difficulty.

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测替米考星的方法
本专利技术涉及一种检测方法，具体是一种快速检测替米考星的方法。
技术介绍
替米考星是一种动物专用的新型大环内酯类抗生素，临床主要用于牛、猪、鸡、绵羊、山羊、兔等感染性疾病，特别是用于畜禽呼吸道疾病，并取得显著疗效。该药具有抗菌活性强、药代动力学特征优良、用量少、毒性小等特点。临床应用表明：替米考星是一种安全有效的新型兽药，具有广阔的应用前景。替米考星具有同泰乐菌素相似的广谱抗菌活性，对革兰氏阳性菌和某些革兰氏阴性菌、霉形体、螺旋体等均有抑制作用，对胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌及霉形体具有比泰乐菌素更强的抗菌活性。Inamoto等报道，替米考星(TMS)、金霉素(CTC)、甲砜霉素(TP)和泰乐菌素(TS)对日本1980～1989年间从猪肺炎损害部位分离出的61株多杀性巴氏杆菌和35株胸膜肺炎放线杆菌的抗菌作用，大多数菌株对TMS、CTC、TP敏感。CTC和TP分别在3.13μg/ml和0.78μg/ml时对51株(83.6%)和46株(75.4%)多杀性巴氏杆菌有抑制作用。TS对几乎所有菌株的抗菌活性较低，MIC≥6.25μg/ml。TMS对23株(37.7%)多杀性巴氏杆菌的MIC≥1.56μg/ml，但在3.13μg/ml时，TP和TMS分别能抑制32株(91.4%)和33株(94.3%)放线杆菌，可见作为同一大环内酯类药物，泰乐菌素对两种细菌的抗菌活性均不及替米考星。SalmonSA等用从美国、加拿大分离到的515株致病菌对头孢噻呋、恩诺沙星、红霉素、磺胺二甲嘧啶、壮观霉素、林可霉素、磺胺嘧啶/TMP、氨苄青霉素和替米考星等9种药物的敏感性进行测定。结果发现，抗菌作用最强的是恩诺沙星和头孢噻呋，替米考星对巴氏杆菌和胸膜肺炎放线杆菌活性中等。替米考星对鸡霉形体表现出较强的体外抗菌活性。Jordan等报道了替米考星和泰乐菌素对家禽6株鸡败血霉形体和3株滑液霉形体的体外MIC值。替米考星对6株鸡败血霉形体的MIC值分别为：＜0.0125、0.0025、0.0025，＞12.5、0.004、0.1、0.0125、0.006和0.025μg/ml；而泰乐菌素的MIC值则分别为：＜0.0125、0.02、0.02、3.2、0.016、0.8、0.0125、0.025和0.025μg/ml。Ziv等应用替米考星对从奶牛乳房炎分离的112株金黄色葡萄球菌和其它致病菌进行MIC-90测定。结果替米考星对乳房炎金黄色葡萄球菌和链球菌均很敏感，其中对化脓性链球菌活性最强(MIC-90为0.04μg/ml)。替米考星在小于3.12μg/ml时能抑制90.8%的其它革兰氏阳性乳房炎致病菌。综上所述，替米考星作为一种较新的大环内酯类抗生素，其较强的抗菌活性和优越的药物动力学特征，使它在畜禽敏感菌引起的肺炎、巴氏杆菌病以及乳房炎等疾病的防治方面发挥着重要作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种快速检测替米考星的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种快速检测替米考星的方法，包括以下步骤：步骤1：取样品加入到缓冲溶液中，融入到光化学发光体系中，再用电化学发光分析系统检测体系的发光强度，与阴性和阳性对照组相比较，若体系的发光强度发生了猝灭现象，且猝灭效率在5%以上，则待检测样品中含有替米考星；经过漩涡混合器混合处理后再经过离心处理，取离心处理后的上清液少量；步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2～4分钟；步骤3：采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有替米考星的洗脱液；步骤4：采用高效液相色谱法对步骤3得到的洗脱液进行检测，所述的高效液相色谱法的具体参数为：色谱柱：C18柱，150mm*3.9mmID柱温：室温流动相：0.05％磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05％磷酸水溶液和乙腈的体积比为100:12；检测器：UV检测器；检测波长：226nm；进样量：50μL；其中，所述的缓冲溶液为：Ph范围为11.0～13.0的氨水-氯化铵缓冲液，所述的二元洗脱剂为异丙醇和乙酸甲酯的混合物，其中异丙醇和乙酸甲酯的重量比为0.5～1:2。作为本专利技术进一步的方案：所述的样品为1g，缓冲溶液为5ml，步骤2中所取的上清液为0.5ml，所述的步骤3中，每次洗脱时所用的洗脱剂为0.5ml。作为本专利技术进一步的方案：所述的步骤1中，漩涡混合器混合处理的时间为0.5～1.5分钟。作为本专利技术再进一步的方案：所述的步骤1中，所述的离心处理的具体操作为：将经混合处理的溶液在离心机中以9000～11000转/分钟的速度离心0.5～1.5分钟。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术快速检测替米考星的方法大大简化了检测步骤，降低了操作难度。具体实施方式下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。本专利技术实施例中，一种快速检测替米考星的方法，包括以下步骤：步骤1：取样品加入到缓冲溶液中，融入到光化学发光体系中，再用电化学发光分析系统检测体系的发光强度，与阴性和阳性对照组相比较，若体系的发光强度发生了猝灭现象，且猝灭效率在5%以上，则待检测样品中含有替米考星；经过漩涡混合器混合处理后再经过离心处理，取离心处理后的上清液少量；步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2～4分钟；步骤3：采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有替米考星的洗脱液；步骤4：采用高效液相色谱法对步骤3得到的洗脱液进行检测，所述的高效液相色谱法的具体参数为：色谱柱：C18柱，150mm*3.9mmID柱温：室温流动相：0.05％磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05％磷酸水溶液和乙腈的体积比为100:12；检测器：UV检测器；检测波长：226nm；进样量：50μL；其中，所述的缓冲溶液为：Ph范围为11.0～13.0的氨水-氯化铵缓冲液，所述的二元洗脱剂为异丙醇和乙酸甲酯的混合物，其中异丙醇和乙酸甲酯的重量比为0.5～1:2。所述的样品为1g，缓冲溶液为5ml，步骤2中所取的上清液为0.5ml，所述的步骤3中，每次洗脱时所用的洗脱剂为0.5ml。所述的步骤1中，漩涡混合器混合处理的时间为0.5～1.5分钟。所述的步骤1中，所述的离心处理的具体操作为：将经混合处理的溶液在离心机中以9000～11000转/分钟的速度离心0.5～1.5分钟。实施例1：本专利技术快速检测替米考星的方法，包括以下步骤：步骤1：取样品加入到缓冲溶液中，融入到光化学发光体系中，再用电化学发光分析系统检测体系的发光强度，与阴性和阳性对照组相比较，若体系的发光强度发生了猝灭现象，且猝灭效率在5%以上，则待检测样品中含有替米考星；经过漩涡混合器混合处理后再经过离心处理，取离心处理后的上清液少量；步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2分钟；步骤3：采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有替米考星的洗脱液；步骤4：采用高效液相色谱法对步骤3得到的洗脱液进行检测，所述的高效液相色谱法的具体参数为：色谱柱：C18柱，150mm*3.9mmID柱温：室温流动相：0.05％磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05％磷酸水溶液和乙腈的体积比为100:12；检测器：UV检测器；检测波长：226nm；进样量：50μ本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速检测替米考星的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：取样品加入到缓冲溶液中，融入到光化学发光体系中，再用电化学发光分析系统检测体系的发光强度，与阴性和阳性对照组相比较，若体系的发光强度发生了猝灭现象，且猝灭效率在5%以上，则待检测样品中含有替米考星；经过漩涡混合器混合处理后再经过离心处理，取离心处理后的上清液少量；步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2～4分钟；步骤3：采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有替米考星的洗脱液；步骤4：采用高效液相色谱法对步骤3得到的洗脱液进行检测，所述的高效液相色谱法的具体参数为：色谱柱：C18柱，150mm*3.9mmID柱温：室温流动相：0.05％磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05％磷酸水溶液和乙腈的体积比为100:12；检测器：UV检测器；检测波长：226nm；进样量：50μL；其中，所述的缓冲溶液为：Ph范围为11.0～13.0的氨水‑氯化铵缓冲液，所述的二元洗脱剂为异丙醇和乙酸甲酯的混合物，其中异丙醇和乙酸甲酯的重量比为0.5～1:2。

【技术特征摘要】
1.一种快速检测替米考星的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：取样品加入到缓冲溶液中，融入到光化学发光体系中，再用电化学发光分析系统检测体系的发光强度，与阴性和阳性对照组相比较，若体系的发光强度发生了猝灭现象，且猝灭效率在5%以上，则待检测样品中含有替米考星；经过漩涡混合器混合处理后再经过离心处理，取离心处理后的上清液少量；步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2～4分钟；步骤3：采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有替米考星的洗脱液；步骤4：采用高效液相色谱法对步骤3得到的洗脱液进行检测，所述的高效液相色谱法的具体参数为：色谱柱：C18柱，150mm*3.9mmID柱温：室温流动相：0.05％磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05％磷酸水溶液和乙腈的体积比为100:12；检测器...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敏芳，徐静，赵春城，胡勇，蒋韦艳，刘金杰，朱倩倩，
申请(专利权)人：无锡艾科瑞思产品设计与研究有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32