一种提高大肠杆菌中己二酸产量的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高大肠杆菌中己二酸产量的方法，属于生物工程领域。本发明专利技术是以敲除了atoB基因的大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，分模块过量表达β‑酮硫解酶基因、3‑羟酰基‑辅酶A脱氢酶基因、3‑羟基己二酰脱氢酶基因、5‑羧基‑2‑戊烯酰辅酶A还原酶基因、己二酰辅酶A，己二酸的产量可达到25.57g/L。此重组菌还可进行循环发酵，最终经过十次循环，己二酸产量累积量达18.94g/L；这对于工业上连续化的大生产有着重要作用，可以减少菌体生长时间，直接利用循环菌体发酵省时，快速，节约成本。

【技术实现步骤摘要】
一种提高大肠杆菌中己二酸产量的方法
本专利技术涉及一种提高大肠杆菌中己二酸产量的方法，属于生物工程领域。
技术介绍
己二酸(Adipicacid，adipate)又称肥酸，是一种重要的有机二元酸，广泛应用于化工生产、有机合成工业、医药、润滑剂制造等方面。目前己二酸的主要生产方式是化学合成，但是该方法的产品收率并不高。此外，在己二酸的化学合成过程中主要以苯为原料，通过化学方法合成，原料和中间产物毒性很强，而且过程中产生大量的N2O等温室气体，环境污染严重且不可持续。为了解决上述问题，人们将目光聚焦到生物合成己二酸的道路上，且做了大量的基础工作。目前报道的主要生物合成己二酸的方法有生物催化法和全生物合成方法。主要的生物催化法主要是利用微生物催化合成己二酸前体顺，顺-粘康酸，然后再利用金属催化剂催化合成己二酸。全生物合成己二酸的方法包括：大肠杆菌以葡萄糖为底物利用乙酰CoA和琥珀酰CoA作为底物全生物合成；酿酒酵母利用脂肪酸氧化法全生物合成己二酸。以葡萄糖为底物全生物合成己二酸具有工艺流程简单、总投入成本低、可循环利用等突出优点，因此备受研究人员青睐。虽然目前在大肠杆菌中已经实现了利用葡萄本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种产己二酸的重组大肠杆菌，其特征在于，是以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，分模块过量表达β‑酮硫解酶基因，3‑羟酰基‑辅酶A脱氢酶基因，3‑羟基己二酰脱氢酶基因，5‑羧基‑2‑戊烯酰辅酶A还原酶基因，己二酰辅酶A合成酶基因；其中，基因Tfu_0875、Tfu_2399以pRSFDuet‑1为表达载体；基因Tfu_0068、Tfu_1648以pTrc99a为表达载体；基因片段Tfu_2576、Tfu_2577以pCDFDuet‑1为表达载体。

【技术特征摘要】
1.一种产己二酸的重组大肠杆菌，其特征在于，是以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，分模块过量表达β-酮硫解酶基因，3-羟酰基-辅酶A脱氢酶基因，3-羟基己二酰脱氢酶基因，5-羧基-2-戊烯酰辅酶A还原酶基因，己二酰辅酶A合成酶基因；其中，基因Tfu_0875、Tfu_2399以pRSFDuet-1为表达载体；基因Tfu_0068、Tfu_1648以pTrc99a为表达载体；基因片段Tfu_2576、Tfu_2577以pCDFDuet-1为表达载体。2.根据权利要求1所述的一种产己二酸的重组大肠杆菌，其特征在于，是以敲除了atoB基因的大肠杆菌BL21(DE3)为宿主。3.一种构建权利要求2所述重组大肠杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以质粒pRSFDuet-1为骨架载体，连接基因片段Tfu_0875、Tfu_2399，得到重组质粒pAD-1；(2)以质粒pTrc99a为骨架载体，连接基因片段Tfu_0068、Tfu_1648，得到重组质粒pAD-4；(3)以质粒pCDFDuet-1为骨架载体，连接基因片段Tfu_2576、Tfu_2577，得到重组质粒pAD-6；(4)将pAD-1、pAD-4、pAD-6转入敲除了atoB基因的大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组大肠杆菌Mad2△atoB。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)将基因片段Tfu_0875及质粒pRSFDuet-1都用EcoRI和HindIII双酶酶切处理后，以T4DNA连接酶连接得到重组质粒pRSF-Tfu_0875；将Tfu_2399及重组质粒pRSF-Tfu_0875都用BglII和KpnI双酶切处理，...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓禹，赵梅，毛银，张晓娟，黄荻萱，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32