The invention discloses a method for rapid detection of Listeria bacteria List S, which comprises the following steps: 1) preparing monoclonal antibody GoldMag coupling; take anti hyperplasia List S bacteria monoclonal antibody and magnetic nano gold particles mixed; at a temperature of 37 DEG C, on the speed of rotation is 10 meter 15rpm, coupling time 30~60min 3~5min, magnetic separation, Kami Kiyo; washed with buffer after cleaning 3 times, with 1mL beads mixed sealer with closed 1H; 2) GoldMag using monoclonal antibody capture bacteria culture: coupling Dan Zengsheng List S bacteria, bacteria concentration will be adjusted to 107CFU/mL, 106CFU/mL, 105CFU/mL, 104CFU/mL, 1mL each take to spare; the sample solution, the concentration of bacteria 1mL 1mL. The invention can disadvantage existing in traditional detection cycle detection method to overcome the long, tedious and time-consuming, the detection time is shortened and the operation steps and the labor intensity is greatly reduced, saving time and labor, achieve rapid and sensitive requirements.
【技术实现步骤摘要】
一种单增李斯特氏菌的快速检测方法
本专利技术涉及一种检测方法,具体是一种单增李斯特氏菌的快速检测方法。
技术介绍
单核细胞增生李斯特氏菌简称单增李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes,LM),是李斯特菌属中最重要的人类食源性病原菌。肉、蛋、海产品、乳制品、蔬菜等食品均是LM的主要污染源,人被LM感染后死亡率可达30%,在新生婴幼儿和免疫力低下的人群中死亡率则高达70%。该菌在4℃冰箱保存的食物中仍能生长繁殖,使其成为冷藏食品中主要的病原菌之一。按照我国国标法规定的检测方法,完成LM初筛过程需72~96h。如此长的检测周期给企业、国家相关部门对日常产品质量监测及LM中毒事件进行快速反馈带来了一定困难。免疫学检测是实现LM快速筛查的有效手段之一。比较经典的流程包括前期增菌、免疫磁珠高效富集及胶体金免疫层析试纸条或ELISA检测等步骤。其中提高免疫磁珠富集效率对缩短LM检出时间具有较大的贡献。免疫磁分离是基于抗原、抗体免疫学反应,利用超顺磁粒子在磁场存在时能迅速磁化并聚集、磁场消失后可重新分散于溶液的特性的一种磁分离方法。一些研究把免疫磁捕获和实时荧光PCR技术结合起来,检测食品中的单核增生李斯特菌。PCR方法和生物传感器方法都具有较高的检测灵敏度,一般可将检测时间减少至24-48小时(依据不同检测项目而言),但是该方法要求具有较高素质的操作人员、较好的检测仪器以及检测条件,因此较难在基层以及企业大面积推广使用,同时检测时间仍很难满足企业对出厂前产品质量安全进行快速反应的实际需求,且该方法无法分辨死/活致病菌以及DNA片段的同源性,易造成假阳性偏 ...
【技术保护点】
一种单增李斯特氏菌的快速检测方法,其特征在于,包括以下步骤:1)制备偶联单抗的金磁微粒;取抗单增生李斯特氏菌单抗与纳米金磁微粒混合;在温度37℃时,放在转速为10‑15rpm的旋转仪上,偶联时间30~60min,磁分离3~5min,弃上清;用清洗缓冲液清洗3遍之后,用1mL封闭剂与磁珠混合封闭1h;2)使用偶联单抗的金磁微粒捕获菌:培养单增生李斯特氏菌,将菌液浓度调整为107CFU/mL、106CFU/mL、105CFU/mL、104CFU/mL,各取1mL备用;取待测样品溶液1mL、各浓度菌液1mL,分别与步骤1)所得偶联单抗的金磁微粒100~150μg,温度37℃,转速10‑15rpm混合孵育30~60min,;孵育后磁分离3~5min后,弃上清,用PBS缓冲液清洗后,复溶于PBS中;3)制作免疫层析试纸条;将单增生李斯特氏菌兔多抗和兔抗鼠二抗喷到硝酸纤维膜上分别作为检测线T线和质控线C线,浓度均为1.0~2.0mg/mL,喷量均为0.5~1.0μL/cm,37℃真空干燥过夜,将样本垫、硝酸纤维膜、吸水纸、滤纸依次粘贴在PVC底板上,贴好后将其切成4mm宽的条子,装卡;将制备好的试 ...
【技术特征摘要】
1.一种单增李斯特氏菌的快速检测方法,其特征在于,包括以下步骤:1)制备偶联单抗的金磁微粒;取抗单增生李斯特氏菌单抗与纳米金磁微粒混合;在温度37℃时,放在转速为10-15rpm的旋转仪上,偶联时间30~60min,磁分离3~5min,弃上清;用清洗缓冲液清洗3遍之后,用1mL封闭剂与磁珠混合封闭1h;2)使用偶联单抗的金磁微粒捕获菌:培养单增生李斯特氏菌,将菌液浓度调整为107CFU/mL、106CFU/mL、105CFU/mL、104CFU/mL,各取1mL备用;取待测样品溶液1mL、各浓度菌液1mL,分别与步骤1)所得偶联单抗的金磁微粒100~150μg,温度37℃,转速10-15rpm混合孵育30~60min,;孵育后磁分离3~5min后,弃上清,用PBS缓冲液清洗后,复溶于PBS中;3)制作免疫层析试纸条;将单增生李斯特氏菌兔多抗和兔抗鼠二抗喷到硝酸纤维膜上分别作为检测线T线和质控线C线,浓度均为1.0~2.0mg/mL,喷量均为0.5~1.0μL/cm,37℃真空干燥过夜,将样本垫、硝酸纤维膜、吸水纸、滤纸依次粘贴在PVC底板上,贴好后将其切成4mm宽的条子,装卡;将制备好的试纸条置于锡箔袋中加干燥剂密封,置于干燥缸保存备用;4)...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨敏,周合,张根义,张进,周朱晨,胡彬,吴念绮,
申请(专利权)人:百奥森江苏食品安全科技有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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