一种致病性鳢源舒伯特气单胞菌的双重PCR检测引物组、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种致病性鳢源舒伯特气单胞菌的双重PCR检测引物组、试剂盒及方法，通过设计的两对特异性引物和优选的反应体系、反应条件，可快速、准确检测致病性鳢源舒伯特气单胞菌，为实验室进一步研究该菌及其致病机理奠定了基础。本发明专利技术突出的优点是建立的多重PCR反应，敏感性强、特异性高，可以快速、准确地检测出样品中的致病性鳢源舒伯特气单胞菌，同时避免了反复培养、冗长的一系列生化反应，节约时间、劳动能力和成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种致病性鳢源舒伯特气单胞菌的双重PCR检测引物组、试剂盒及方法。
技术介绍
鳢科鱼类（Channidae）是我国重要的淡水经济鱼类，在我国分布广泛，其肉质细嫩，味道鲜美，具有较高的营养价值，其中斑鳢(Channa maculata)和乌鳢(Channa argus)和以斑鳢为母本，乌鳢为父本杂交获得杂交鳢(Channa maculata♀ × C. argus♂)均是我国重要的养殖品种，也是我国外贸出口的重要淡水经济鱼类。随着我国池塘鳢科鱼类高密度养殖的发展，养殖鳢科鱼类病害的问题越来越严重，导致鳢科鱼类发病病原包括嗜水气单胞菌、诺卡氏菌、舒伯特气单胞菌等。鳢内脏类结节病是近年来新暴发的鳢科鱼类细菌性病，该病的特点是病鱼体表无明显变化，肝、脾、肾等内脏组织出现白色类结节症状，死亡率可达45%以上，通过分离鉴定确定该病的致病菌为舒伯特气单胞菌。自2009年首次报道以来，鳢内脏类结节病在全国范围内均有发生，近几年该病导致湖北省养殖乌鳢、广东省养殖斑鳢和杂交鳢大面积死亡，造成严重的经济损失。由于该病与鳢科鱼类另一主要疾病诺卡氏本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种致病性鳢源舒伯特气单胞菌的双重PCR检测引物组，包括检测gyrB基因的引物对和检测hlyA基因的引物对，序列分别如下：gyrB引物对：上游引物：TCAACTCCGCTGTCTCTAACCTG（SEQ？ID？NO.1），下游引物：GCACCCTTACGGCAAGTCATC（SEQ？ID？NO.2）；hlyA引物对：上游引物：CAGGCTTCCAGCACTGAATACT（SEQ？ID？NO.3），下游引物：CCAGTCCCACCACTTCACCT（SEQ？ID？NO.4）。

【技术特征摘要】
1.一种致病性鳢源舒伯特气单胞菌的双重PCR检测引物组，包括检测gyrB基因的引物对和检测hlyA基因的引物对，序列分别如下：
gyrB引物对：
上游引物：TCAACTCCGCTGTCTCTAACCTG（SEQ ID NO.1），
下游引物：GCACCCTTACGGCAAGTCATC（SEQ ID NO.2）；
hlyA引物对：
上游引物：CAGGCTTCCAGCACTGAATACT（SEQ ID NO.3），
下游引物：CCAGTCCCACCACTTCACCT（SEQ ID NO.4）。
2.一种致病性鳢源舒伯特气单胞菌的双重PCR检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的检测引物组。
3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1所述的检测引物组、10×PCR buffer、dNTP、MgCl2、Taq DNA聚合酶、阳性质控品、阴性质控品。
4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性质控品为含有gyrB基因序列（GenBank登录号JQ319030）的T载体克隆和含有hlyA基因序列（GenBank登录号JX996182）的T载体克隆；阴性质控品为无菌ddH2O。
5.一种致病性鳢源舒伯特气单胞菌的双重PCR检测方法，包括以下步骤：
1)从待检鳢的组织器官分离细菌；
2)以分离菌株为模板，使用分别根据舒伯特气单胞菌的促旋酶的B亚单位基因（gyrB）、溶血素基因（hlyA）基因序列设计合成的两对引物，在同一反应体系中进行双重PCR扩增，得到扩增产物，其中引物序列如下：
gyrB引物对：
上...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘春，李凯彬，王庆，吴淑勤，王芳，常藕琴，梁慧丽，曾伟伟，王英英，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院珠江水产研究所，
类型：发明
国别省市：