一种通用的CaMV 35S启动子定量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种通用的CaMV（花椰菜花叶病毒）35S启动子定量检测方法，涉及分子生物学及转基因检测技术领域。本定量检测方法是：①收集CaMV35S启动子增强子保守区序列；②利用该序列特征设计引物探针；③PCR扩增；④建立标准曲线；⑤定量体系的精确性验证。本发明专利技术避免了现有一些CaMV35S启动子检测方法存在的检测引物/探针与检测靶标序列不完全匹配的问题；避免了现有一些CaMV35S启动子检测方法存在的两侧引物结合位点数不同而引起的多条扩增产物的问题；适用于含有CaMV35S启动子的转基因油菜、水稻、大豆等转基因作物的定量检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学及转基因检测
，尤其涉及一种通用的CaMV（花椰菜花叶病毒）35S启动子定量检测方法。 具体地说，本专利技术是比对收集到的不同来源的CaMV 35S启动子序列得到增强子序列中较长的保守区，设计以增强子保守区为检测靶标序列的引物探针，筛选出特异性强、灵敏度高的CaMV 35S启动子检测方法。其应用是该方法可适用于CaMV 35S启动子筛查原件的的检测，并解决了原有CaMV 35S启动子检测系统中一些检测方法存在的与检测靶标的匹配性不完全匹配以及存在多条扩增产物等一些无法解决的问题。 
技术介绍
近年来，玉米、大豆、棉花、油菜和番茄等转基因作物已在很多国家获准种植和生产，有的被加工成食品、饲料或用作食品添加剂。由于转基因产品的生态安全和食用安全一直备受争议，30多个国家和地区相继实施转基因产品标识制度。 转基因检测方法，根据检测靶标的不同，分为载体特异性检测、转化事件特异性检测和筛查检测的方法。 载体特异性检测方法利用基因元件之间的边界序列特征，能够有效鉴定使用类似基因元件的不同构建体，而且存在序列信息容易获本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通用CaMV？35S启动子定量检测方法，其特征在于：①收集CaMV？35S启动子增强子保守区序列：收集GMDD（GMO？Detection？Method？Database，转基因检测方法数据库，http://gmdd.shgmo.org/）所公布的不同转化事件来源的CaMV？35S启动子序列，通过其序列比对结果，以其增强子序列的保守区为检测靶标，其序列特征是：由来源于野生型CaMV？35S启动子第7018至7344个碱基组成，如图1所示：②利用该序列特征设计引物探针：a、合成引物序列如下：35SEnhF187：5’CATCATTGCGATAAAGGAAAGGC？3’和35SEnhR311：...

【技术特征摘要】
1.一种通用CaMV 35S启动子定量检测方法，其特征在于：
①收集CaMV 35S启动子增强子保守区序列：
收集GMDD（GMO Detection Method Database，转基因检测方法数据库，
http://gmdd.shgmo.org/）所公布的不同转化事件来源的CaMV 35S启动子序列，
通过其序列比对结果，以其增强子序列的保守区为检测靶标，其序列特征是：
由来源于野生型CaMV 35S启动子第7018至7344个碱基组成，如图1所示：
②利用该序列特征设计引物探针：
a、合成引物序列如下：
35SEnhF187：5’CATCATTGCGATAAAGGAAAGGC 3’和35SEnhR311：5’
TGCTTTGAAGACGTGGTTGGA 3’...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴刚，李伟，李晓飞，张丽，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：