一种单克隆杂交瘤的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种单克隆杂交瘤细胞的制备方法，包括以下步骤：步骤一，融合：使用聚乙二醇水溶液融合骨髓瘤细胞与抗原免疫后的淋巴细胞，得融合细胞；步骤二，培养：将融合细胞接入HAT液体培养基中于二氧化碳培养箱中培养，得杂交瘤细胞；步骤三，筛选：将杂交瘤细胞上清液采用间接ELISA筛选，得阳性杂交瘤细胞；步骤四，亚克隆：将阳性杂交瘤细胞接入亚克隆半固体培养基中于二氧化碳培养箱培养，得单个杂交瘤细胞集落；步骤五，扩大培养：取单个杂交瘤细胞集落的细胞接入胎牛血清培养液中于二氧化碳培养箱中扩大培养，即得单克隆杂交瘤细胞。该制备方法培养周期短、成本低、筛得的阳性克隆细胞株全。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，特别涉及。
技术介绍
自从Kohler和Milstein专利技术单克隆抗体技术以来,该技术不断发展完善,在生物医药领域疾病的诊断、治疗以及科学研究中得到了广泛应用，市场需求越来越大。但制备单克隆抗体一个必不可少的环节而且也是最重要环节就是阳性杂交瘤的克隆建系。融合后筛选出的杂交瘤细胞群系不完全是纯系，仍属于异质性的细胞群。因此，必须根据实验目的对杂交细胞群体进一步纯化，以便获得同质性的细胞群体。最常用的纯化方法就是杂交瘤细胞的克隆化培养。克隆化培养是指单个杂交细胞在一个独立的空间增值，最终扩增为一群相对较纯 的，且能够稳定表达某些特定性状的细胞群体的培养方式。用于这种方法的细胞群体由于均来源于同一个祖先细胞，故可认为其遗传特性较为一致。常见的克隆化培养方法有以下五种I :有限稀释法这是一种比较传统的方法，即将ELISA检测出的阳性孔，稀释到4-8细胞/mL。取20mL放入96孔培养板中培养。这样约有36%的孔含有I个细胞，当细胞长到2(Γ80%孔底时，用ELISA检测，将检测出的阳性孔按照上述方法再克隆，直到所有具有杂交瘤的孔中都呈阳性，即阳性率需达到1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单克隆杂交瘤细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）融合：使用聚乙二醇水溶液融合骨髓瘤细胞与抗原免疫后的淋巴细胞，得融合细胞；（2）培养：将融合细胞接入HAT液体培养基中于二氧化碳培养箱中培养，得杂交瘤细胞；（3）筛选：将杂交瘤细胞上清液采用间接ELISA筛选，得阳性杂交瘤细胞；（4）亚克隆：将阳性杂交瘤细胞接入亚克隆半固体培养基中于二氧化碳培养箱培养，得单个杂交瘤细胞集落；（5）扩大培养：取单个杂交瘤细胞集落的细胞接入胎牛血清培养液中于二氧化碳培养箱中扩大培养，即得单克隆杂交瘤细胞。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周军，王玉燕，冯展波，
申请(专利权)人：南京巴傲得生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：