本发明专利技术涉及生物技术，特别是涉及一种抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体及其制备方法和用途。本发明专利技术提供一种抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体，其抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：5或其保守型变异序列，其抗体重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：1或其保守型变异序列。本发明专利技术发明专利技术人通过杂交瘤技术获得鼠抗心磷脂/β2糖蛋白1复合物抗体的杂交瘤细胞株，并克隆出抗体的可变区序列，并进一步利用基因工程技术制备获得的抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体与心磷脂/β2糖蛋白I复合物具有良好的亲和力，可以应用于ELISA检测试剂盒中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术，特别是涉及一种抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体及其制备方法和用途。
技术介绍
抗磷脂抗体综合征(antiphospholipidsyndromeAPS)的临床征象尚未完全清楚，主要临床表现为：血栓、习惯性流产、血小板减少和神经精神症状等。根据现行指南，狼疮抗凝物、抗心磷脂抗体和β2糖蛋白I抗体是主要的血清学临床检测抗磷脂抗体的诊断方法。如果3项皆阳性，则表明该病人或健康人抗磷脂抗体综合征高危，而如果只有1项为阳性，那么危险性则较低。研究表明这3个检项对外部因子非常敏感，很难对检测方法标准化。狼疮抗凝物与血栓的形成最相关，但是，检测狼疮抗凝物的准确性很大程度上取决于血液样本的处理和血浆的质量。所检测的抗心磷脂抗体实际是针对于心磷脂/β2糖蛋白1复合物的抗体，抗心磷脂抗体和抗β2糖蛋白1抗体的ELISA检测对血液处理过程不敏感，测定方法也不依赖于抗体的功能(如抗凝)，而仅仅依赖于抗体与包被的心磷脂/β2糖蛋白1复合物和β2糖蛋白1的结合。但是，不同厂家提供的ELISA试剂盒检测结果的差异很大，且假阳性率较多。假阳性产生的原因可能来自于非特异性抗体的干扰和试剂盒中所采用的校准品、对照品的制备。ELISA检测方法主要依赖于试剂盒中的校准品和对照品对待检血清样本进行比较分析和阳性判别。目前这些校准品和对照品，都是以病人的阳性血清、健康人血清通过混合、配制成一定的浓度梯度而来。这就需要有稳定的血清来源，并且血清原料要具有代表性。考虑到生物安全问题，各大医院都对血清样本执行严格的管理，导致ELISA试剂盒的生产过程血清原料供应短缺。另一方面，临床收集的血清原料具有严重的个体差异，使用过程中常导致试剂盒的检测数据的波动和结果判读的不一致。这是采用临床血清所生产的ELISA试剂盒在应用过程中难以回避的问题。在抗心磷脂抗体的检测中，首先用心磷脂/β2糖蛋白1复合物包板，然后加入样品(校准品)，样品中的抗心磷脂抗体的可变区与包被的心磷脂/β2糖蛋白1复合物结合，然后再加入酶标的抗人IgGFc抗体。如果要检测抗心磷脂IgM型抗体，则可加入抗人IgMFc的酶标II抗，如果要检测抗心磷脂IgA型抗体，则可加入抗人IgAFc的酶标II抗。因此，制备鼠/人嵌合的抗心磷脂/β2GP1复合物抗体，可以代替血清原料来制备ELISA试剂盒中的校准品和对照品，从而解决血清来源受限和个体差异导致批间差异的问题。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体，用于解决现有技术中的问题。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体，其抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：5或其保守型变异序列，其抗体重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：1或其保守型变异序列。所述保守型变异序列通常指通过氨基酸保守性替换变化获得的序列，所述保守性替换通常是指性质相似的另一个氨基酸取代指定的氨基酸，例如，可以被认为是保守型替换(性质相似)的例子包括但不限于：a)丙氨酸、丝氨酸和苏氨酸；b)谷氨酸和天冬氨酸；c)天冬酰胺和谷氨酰胺；d)精氨酸和赖氨酸；e)异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸和；f)苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸。具体的，所述抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体为鼠抗心磷脂抗体与人抗体所形成的嵌合抗体。更具体的，所述嵌合抗体可以是鼠抗心磷脂抗体的可变区片段分别与人Ig恒定区形成的嵌合抗体，所述人Ig恒定区可以是人IgG、IgM、IgA恒定区，所形成的嵌合抗体可以是IgG、IgM、IgA型嵌合抗体。所述抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体中，“抗体”以最广泛的意义使用，具体包括但不限于单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)和其抗体片段。对于本领域技术人员而言应当清楚的是，在许多情况下“抗体片段”可替代抗体，抗体片段的例子包括但不限于：Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双特异抗体；线性抗体；单链抗体分子；纳米抗体(来自Ablynx的技术)；结构域抗体(来自Domantis的技术)；和由抗体片段形成的多特异性抗体等。本专利技术第二方面提供一种分离的多核苷酸，编码所述抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体的重链和/或轻链的可变区或全长氨基酸。本专利技术第三方面提供一种构建体，含有所述分离的多核苷酸。具体的，所述构建体由所述分离的多核苷酸插入到表达载体的多克隆位点构建而成。本专利技术中的表达载体通常指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。优选的，所述表达载体选自pIRES或pcDNA3.1中的一种或多种的组合。本专利技术第四方面提供一种嵌合抗体的表达系统，所述表达系统含有所述构建体或基因组中整合有外源的所述多核苷酸。任何适用于表达载体进行表达的细胞都可以作为宿主细胞。例如，所述宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。优选的，所述宿主细胞选自中国仓鼠卵巢(ChineseHamsterOvary(CHO))细胞系，多种COS细胞系，HeLa细胞系，骨髓细胞系如SP2/0细胞系，NS0细胞系，YB2/0细胞系等，以及转化的B-细胞或杂交瘤细pIRES或pcDNA3.1胞中的一种或多种的组合。本专利技术第五方面提供所述抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体的制备方法，包括如下步骤：在适合表达所述抗体的条件下，培养所述的嵌合抗体的表达系统，从而表达出所述的嵌合抗体，纯化分离出所述的嵌合抗体。本专利技术中所用的宿主细胞均为现有技术，可通过商业途径直接获取，培养中所用的培养基亦为各种常规培养基，本领域技术人员可根据经验选择适用的培养基，在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。在上面的方法中的重组多肽可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。本专利技术从单克隆培养的杂交瘤细胞株本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体，其抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：5或其保守型变异序列，其抗体重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：1或其保守型变异序列。
【技术特征摘要】
1.一种抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体，其抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQID
NO：5或其保守型变异序列，其抗体重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：1或其保守
型变异序列。
2.如权利要求1所述的一种抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体，其特征在于，所述嵌
合抗体为鼠抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物抗体的可变区片段与人Ig恒定区形成的嵌合抗体。
3.如权利要求1所述的一种抗心磷脂/β2糖蛋白I复合物的嵌合抗体，其特征在于，所述嵌
合抗体为IgG、IgM、IgA型嵌合抗体。
4.一种分离的多核苷酸，编码如权利要求1-3任一权利要求所述的抗心磷脂/β2糖蛋白I复
合物的嵌合抗体的重链和/或轻链的可变区或全长氨基酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：王红勋，郭延荣，范磊，孙祥明，包骏，
申请(专利权)人：上海科新生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。