无血清无蛋白培养基和制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种无血清无蛋白培养基，所述培养基由(a)第一组份：氨基酸、维生素、无机盐和碳源；(b)第二组分：聚胺和肽类；(c)第三组分：锰离子、嘌呤类和嘧啶类；和(d)第四组分：非离子活性剂组成，所述肌肽类在所述无血清无蛋白培养基中的浓度为4

【技术实现步骤摘要】
无血清无蛋白培养基和制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物领域，具体地涉及一种无血清无蛋白培养基和制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]现有的广泛使用于许多细胞培养中的培养基，均包含血清或蛋白质组分，一般都含有生长因子和广泛类型的有益于细胞生长和培养的未被表征的物质，这些物质是潜在变异源，不利于产品的质量控制。而且，以血清或蛋白为基础的细胞培养基存在成分不明确，不同批次之间质量差异大，影响细胞标准化培养的缺陷。
[0003]目前，针对CHO平台细胞的培养一般使用含血清、带蛋白的培养基，在培养过程中，血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞)。但是，血清含一些对细胞产生毒性的物质，影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。此外，血清中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响可能导致实验失败或实验结果不可靠性。血清生产制作过程复杂、批间差异大，使得实验和生产的标准化困难，而培养基中蛋白质使得某些转基因蛋白生物药品生产中分离纯化工作很难完成。
[0004]因此，本领域亟需开发化学组分确定并且不含血清和不含蛋白的培养基，使得细胞培养过程中产生杂质少易于分离纯化。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的旨在提供一种无血清无蛋白培养基，所述培养基化学组分确定并且不含血清和不含蛋白，从而使得细胞培养过程中产生杂质少易于分离纯化。
[0006]本专利技术的第一方面，提供了一种无血清无蛋白培养基，所述培养基包括以下组分：(a)第一组份：氨基酸、维生素、无机盐和碳源；(b)第二组分：聚胺和肽类；(c)第三组分：锰离子、嘌呤类和嘧啶类；和(d)第四组分：非离子活性剂；其中，所述第一组份中的氨基酸选自下组：L
‑
酪氨酸二钠盐、L
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半胱氨酸盐酸盐、L
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色氨酸、L
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赖氨酸单盐酸盐、L
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组氨酸、L
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苏氨酸、L
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缬氨酸、L
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异亮氨酸、L
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亮氨酸、L
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甲硫氨酸、L
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苯基丙氨酸、L
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甘氨酸盐酸盐、L
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丙氨酸、L
ꢀ‑
精氨酸单盐酸盐、L
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天冬酰胺、L
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脯氨酸、L
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丝氨酸、L
‑
谷氨酸、L
‑
天冬氨酸、或其组合；所述第一组份中的维生素选自下组：维生素B1盐酸盐、维生素B2、烟酰胺、维生素B5、维生素B6、维生素B12、维生素H、酒石酸氢胆碱、叶酸、α
‑
硫辛酸、或其组合；所述第一组份中的无机盐选自下组：亚硒酸钠、硫酸锌、硫酸铜、硫酸铁(II)、硫酸镁、氯化钙、氯化钾、磷酸钠、碳酸氢钠、硫代硫酸钠、或其组合 ；所述第一组份中的碳源选自下组：葡萄糖、丙酮酸钠、或其组合；所述第二组分中的聚胺选自下组：腐胺或其衍生物、亚精胺或其衍生物、精胺或其
衍生物、尸胺或其衍生物、或其组合；所述第二组分中的肽类选自下组：肌肽类、多肽化合物、或其组合；所述第三组分中的锰离子选自下组：氯化锰、螯合锰或其组合；所述第三组分中的嘌呤类选自下组：次黄嘌呤、腺嘌呤或其组合；所述第四组分中的非离子表面活性剂选自下组：Pluronic F
‑
68、Tween、或其组合。
[0007]在另一优选例中，所述培养基包括以下组分：(a)第一组份：氨基酸、维生素、无机盐和碳源；(b)第二组分：聚胺和肽类；(c)第三组分：锰离子、嘌呤类和嘧啶类；和(d)第四组分：非离子活性剂；其中，所述第一组份包括以下氨基酸或其盐：L
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酪氨酸二钠盐、L
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半胱氨酸、L
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色氨酸、L
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赖氨酸、L
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组氨酸、L
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苏氨酸、L
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缬氨酸、L
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异亮氨酸、L
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亮氨酸、L
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甲硫氨酸、L
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苯基丙氨酸、L
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甘氨酸、L
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丙氨酸、L
ꢀ‑
精氨酸、L
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天冬酰胺、L
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脯氨酸、L
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丝氨酸、L
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谷氨酸和L
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天冬氨酸；所述第一组份包括以下维生素：维生素B1、维生素B2、烟酰胺、维生素B5、维生素B6、维生素B12、维生素H、酒石酸氢胆碱、叶酸和α
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硫辛酸；所述第一组份中的无机盐包括：亚硒酸钠、硫酸锌、硫酸铜、硫酸铁(II)、硫酸镁、氯化钙、氯化钾、磷酸钠、碳酸氢钠、和硫代硫酸钠；所述第一组份中的碳源选自下组：葡萄糖、丙酮酸钠、或其组合；所述第二组分中的聚胺选自下组：腐胺、亚精胺、精胺、尸胺、或其组合；所述第二组分中的肽类选自下组：(i)肌肽类、或(ii)肌肽类与多肽化合物的组合，其中，所述多肽化合物选自二肽谷氨酰胺(L
‑
丙氨酰
‑
L
‑
谷氨酰胺)、L
‑
还原型谷胱甘肽；所述第三组分中的锰离子选自下组：氯化锰、螯合锰或其组合；所述第三组分中的嘌呤类选自下组：次黄嘌呤、腺嘌呤或其组合；所述第三组分中的嘧啶类选自下组：胸苷、尿苷、胞嘧苷；所述肌肽类在所述无血清无蛋白培养基中的浓度为4
‑
50mM(较佳地5
‑
25mM，更佳地8
‑
20mM)；所述锰离子在所述无血清无蛋白培养基中的浓度为0.001
‑
0.05mM(0.002～0.010mM，更佳地0.003～0.008mM)。
[0008]在另一优选例中，所述无血清无蛋白培养基的pH为6.8
‑
7.5，较佳地pH 为7.0
‑
7.2。
[0009]在另一优选例中，所述培养基适合用于CHO细胞培养。
[0010]在另一优选例中，所述第四组分中的非离子表面活性剂选自下组：Pluronic F
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68、Tween、或其组合。
[0011]在另一优选例中，所述第一组分中氨基酸的各组分在所述无血清无蛋白培养基的浓度为：L
‑
酪氨酸二钠盐
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5mML
‑
半胱氨酸盐酸盐
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ1‑
5mM
L
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色氨酸
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1
‑
1 mML
‑
赖氨酸单盐酸盐
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.5
‑
5 mML
‑
组氨酸
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无血清无蛋白培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分：(a)第一组份：氨基酸、维生素、无机盐和碳源；(b)第二组分：聚胺和肽类；(c)第三组分：锰离子、嘌呤类和嘧啶类；和(d)第四组分：非离子活性剂；其中，所述第一组份包括以下氨基酸或其盐：L
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酪氨酸二钠盐、L
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半胱氨酸、L
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色氨酸、L
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赖氨酸、L
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组氨酸、L
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苏氨酸、L
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缬氨酸、L
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异亮氨酸、L
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亮氨酸、L
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甲硫氨酸、L
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苯基丙氨酸、L
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甘氨酸、L
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丙氨酸、L
ꢀ‑
精氨酸、L
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天冬酰胺、L
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脯氨酸、L
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丝氨酸、L
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谷氨酸和L
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天冬氨酸；所述第一组份包括以下维生素：维生素B1、维生素B2、烟酰胺、维生素B5、维生素B6、维生素B12、维生素H、酒石酸氢胆碱、叶酸和α
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硫辛酸；所述第一组份中的无机盐包括：亚硒酸钠、硫酸锌、硫酸铜、硫酸铁(II)、硫酸镁、氯化钙、氯化钾、磷酸钠、碳酸氢钠、和硫代硫酸钠；所述第一组份中的碳源选自下组：葡萄糖、丙酮酸钠、或其组合；所述第二组分中的聚胺选自下组：腐胺、亚精胺、精胺、尸胺、或其组合；所述第二组分中的肽类选自下组：(i)肌肽类、或(ii)肌肽类与多肽化合物的组合，其中，所述多肽化合物选自二肽谷氨酰胺(L
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丙氨酰
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L
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谷氨酰胺)、L
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还原型谷胱甘肽；所述第三组分中的锰离子选自下组：氯化锰、螯合锰或其组合；所述第三组分中的嘌呤类选自下组：次黄嘌呤、腺嘌呤或其组合；所述第三组分中的嘧啶类选自下组：胸苷、尿苷、胞嘧苷；所述肌肽类在所述无血清无蛋白培养基中的浓度为4
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50mM；所述锰离子在所述无血清无蛋白培养基中的浓度为0.001
‑
0.05mM；所述无血清无蛋白培养基的pH为6.8
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7.5。2. 如权利要求1所述培养基，其特征在于，所述第一组分中氨基酸的各组分在所述无血清无蛋白培养基的浓度为：L
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酪氨酸二钠盐
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ1‑
5mML
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半胱氨酸盐酸盐
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5mML
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色氨酸
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0.1
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1 mML
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赖氨酸单盐酸盐
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.5
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5 mML
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组氨酸
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1
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2 mML
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苏氨酸
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10 mML
ꢀ‑
缬氨酸
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1
‑
5 mML
‑
异亮氨酸
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1
‑
5 mML
‑
亮氨酸
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ1‑
5 mML
‑
甲硫氨酸
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1
ꢀ‑
2 mML
‑
苯基丙氨酸
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1
‑
5 mML
‑
甘氨酸盐酸盐
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10 mML
‑
丙氨酸
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0.5
‑
10 mML
ꢀ‑
精氨酸单盐酸盐
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ1‑ꢀ
8 mM
L
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天冬酰胺
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ1‑
8 mML
‑
脯氨酸
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ2‑
8 mML
‑
丝氨酸
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1
‑
5 mML
‑
谷氨酸
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1
...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄晓卫，俞亚波，
申请(专利权)人：上海科新生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：