【技术实现步骤摘要】
一种哺乳动物细胞的培养基及其培养方法和抗体的制备方法
[0001]本专利技术涉及细胞培养
，尤其涉及一种哺乳动物细胞的培养基及其培养方法和抗体的制备方法。
技术介绍
[0002]重组抗体的商业化应用越来越广泛，降低抗体的生产成本对其商业化应用极为重要。在影响抗体生产成本的因素中，表达量是最重要的因素之一，细胞株产率的提高能显著降低成本。提高表达量的方法主要有高表达克隆筛选、细胞株改造、载体改造、培养基优化、培养工艺优化等，其中细胞株和载体的改造周期一般在6个月以上，通过周期更短、更灵活的培养基和培养工艺优化进行表达量提升至关重要。
[0003]细胞培养工艺历时多年的发展，从低密度接种培养到高密度接种培养，从批次培养模式、补料流加到连续流培养模式，尤其是国内生物药行业处于兴起阶段，培养工艺的研究仍有较多提升空间。
[0004]高密度接种培养是指以较高的密度(一般高于5
×
105cells/ml)接种细胞，然后进行分批流加培养，该方法可使细胞以代谢最旺盛状态开始培养周期、以最短时间达到最高细胞密度，从而缩短培养周期、提高目标蛋白的产量。然而该工艺并不是通用的，有些细胞在高密度接种达到最高细胞密度后会快速凋亡，难以维持在高密度进行蛋白生产，反而使得最终产量大幅降低。如何在高密度接种后促进细胞增殖尽快达到平台，如何使细胞维持在平台进行较长时间的蛋白表达，是开发该工艺的关键。另外，目前的高密度接种的实现是在N
‑
1种子大体积培养后离心换液后浓缩或者N
‑>1灌流培养，这两种方式在商业化生产时会显著提高生产成本，而且离心或灌流工艺实现难度大。
技术实现思路
[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种哺乳动物细胞的培养基及其培养方法和抗体的制备方法。该培养基和培养方法能够有效地提高细胞密度和抗体产量，相对传统工艺，细胞密度提升20％，抗体表达量提高30％以上。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]一种高密度细胞培养的补料培养基A，包括水和如下组分：
[0008]氨基酸1410～141100mg/L、硫酸镁100
‑
1000mg/L、氯化钙100
‑
1000mg/L、氯化钾1000
‑
5000mg/L、氯化胆碱1000
‑
5000mg/L、肌醇1000
‑
5000mg/L、丙酮酸钠1000
‑
5000mg/L、Poloxamer 188 1000
‑
5000mg/L、磷酸二氢钠1000
‑
5000mg/L、葡萄糖50
‑
100g/L、核黄素10
‑
100mg/L、维生素B12
[0009]10
‑
100mg/L、谷胱甘肽1
‑
10mg/L、叶酸1
‑
10mg/L、柠檬酸铁100
‑
500mg/L、生物素1
‑
10mg/L、硫辛酸1
‑
10mg/L、硫胺素盐酸盐1
‑
10mg/L、烟酰胺1
‑
10mg/L、乙醇胺盐酸盐1
‑
10mg/L、盐酸吡哆醇1
‑
10mg/L、4
‑
氨基苯甲酸1
‑
10mg/L、亚油酸钠1
‑
10mg/L、D
‑
泛酸钙1
‑
10mg/L、腐胺盐酸盐1
‑
10mg/L、亚硒酸钠1
‑
10mg/L、亚麻酸1
‑
10mg/L、五水硫酸铜0.1
‑
10mg/L、氯化
钴1
‑
10mg/L、四水氯化锰1
‑
10mg/L、氯化镍1
‑
10mg/L、偏硅酸钠1
‑
10mg/L、偏矾酸铵1
‑
10mg/L、钼酸铵1
‑
10mg/L。
[0010]一些具体实施例中，所述补料培养基A包括补料培养基A1和补料培养基A2，其中，
[0011]所述补料培养基A1由水和如下组分组成：
[0012]L
‑
蛋氨酸1286mg/L、L
‑
苯丙氨酸4652mg/L、L
‑
天冬酰胺10800mg/L、
[0013]L
‑
脯氨酸4091mg/L、L
‑
赖氨酸5363mg/L、L
‑
亮氨酸8600mg/L、
[0014]L
‑
天门冬氨酸9200mg/L、L
‑
丝氨酸6600mg/L、L
‑
苏氨酸7448mg/L、L
‑
缬氨酸6030mg/L、L
‑
异亮氨酸6664mg/L、L
‑
谷氨酸5851mg/L、
[0015]L
‑
精氨酸7292mg/L、L
‑
羟脯氨酸200mg/L、L
‑
组氨酸2379mg/L、
[0016]甘氨酸150mg/L、硫酸镁20mg/L、氯化钙232mg/L、
[0017]氯化钾650mg/L、氯化胆碱700mg/L、肌醇2000mg/L、
[0018]丙酮酸钠1600mg/L、Poloxamer 188 1000mg/L、磷酸二氢钠1200mg/L、
[0019]D
‑
葡萄糖80000mg/L、核黄素10mg/L、维生素B12 20mg/L、
[0020]柠檬酸铁50mg/L、L
‑
还原型谷胱甘肽3mg/L、叶酸8mg/L、
[0021]生物素2mg/L、(
±
)
‑
α
‑
硫辛酸1100mg/L、硫胺素盐酸盐1mg/L、
[0022]乙醇胺盐酸盐2mg/L、吡哆醇盐酸盐1mg/L、4
‑
氨基苯甲酸1mg/L、
[0023]亚油酸钠盐3mg/L、D
‑
泛酸半钙盐2mg/L、腐胺盐酸盐0.1mg/L、
[0024]烟酰胺0.4mg/L、亚硒酸钠0.5mg/L、氯化钴六水合物0.0001mg/L、
[0025]四水氯化锰0.00001mg/L、六水氯化镍0.00006mg/L、偏硅酸钠0.013mg/L、偏钒酸铵0.05mg/L、钼酸铵四水合物0.00001mg/L和五水硫酸铜0.1mg/L；
[0026]所述补料培养基A2由水和如下组分组成：
[0027]L
‑
蛋氨酸1286mg/L、L
‑
苯丙氨酸4652mg/L、L
...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种高密度细胞培养的补料培养基A，其特征在于，包括水和如下组分：氨基酸1410～141100mg/L、硫酸镁100
‑
1000mg/L、氯化钙100
‑
1000mg/L、氯化钾1000
‑
5000mg/L、氯化胆碱1000
‑
5000mg/L、肌醇1000
‑
5000mg/L、丙酮酸钠1000
‑
5000mg/L、Poloxamer 188 1000
‑
5000mg/L、磷酸二氢钠1000
‑
5000mg/L、葡萄糖50
‑
100g/L、核黄素10
‑
100mg/L、维生素B1210
‑
100mg/L、谷胱甘肽1
‑
10mg/L、叶酸1
‑
10mg/L、柠檬酸铁100
‑
500mg/L、生物素1
‑
10mg/L、硫辛酸1
‑
10mg/L、硫胺素盐酸盐1
‑
10mg/L、烟酰胺1
‑
10mg/L、乙醇胺盐酸盐1
‑
10mg/L、盐酸吡哆醇1
‑
10mg/L、4
‑
氨基苯甲酸1
‑
10mg/L、亚油酸钠1
‑
10mg/L、D
‑
泛酸钙1
‑
10mg/L、腐胺盐酸盐1
‑
10mg/L、亚硒酸钠1
‑
10mg/L、亚麻酸1
‑
10mg/L、五水硫酸铜0.1
‑
10mg/L、氯化钴1
‑
10mg/L、四水氯化锰1
‑
10mg/L、氯化镍1
‑
10mg/L、偏硅酸钠1
‑
10mg/L、偏矾酸铵1
‑
10mg/L、钼酸铵1
‑
10mg/L。2.根据权利要求1所述的补料培养基A，其特征在于，包括补料培养基A1和补料培养基A2，其中，所述补料培养基A1由水和如下组分组成：L
‑
蛋氨酸1286mg/L、L
‑
苯丙氨酸4652mg/L、L
‑
天冬酰胺10800mg/L、L
‑
脯氨酸4091mg/L、L
‑
赖氨酸5363mg/L、L
‑
亮氨酸8600mg/L、L
‑
天门冬氨酸9200mg/L、L
‑
丝氨酸6600mg/L、L
‑
苏氨酸7448mg/L、L
‑
缬氨酸6030mg/L、L
‑
异亮氨酸6664mg/L、L
‑
谷氨酸5851mg/L、L
‑
精氨酸7292mg/L、L
‑
羟脯氨酸200mg/L、L
‑
组氨酸2379mg/L、甘氨酸150mg/L、硫酸镁20mg/L、氯化钙232mg/L、氯化钾650mg/L、氯化胆碱700mg/L、肌醇2000mg/L、丙酮酸钠1600mg/L、Poloxamer 188 1000mg/L、磷酸二氢钠1200mg/L、D
‑
葡萄糖80000mg/L、核黄素10mg/L、维生素B12 20mg/L、柠檬酸铁50mg/L、L
‑
还原型谷胱甘肽3mg/L、叶酸8mg/L、生物素2mg/L、(
±
)
‑
α
‑
硫辛酸1100mg/L、硫胺素盐酸盐1mg/L、乙醇胺盐酸盐2mg/L、吡哆醇盐酸盐1mg/L、4
‑
氨基苯甲酸1mg/L、亚油酸钠盐3mg/L、D
‑
泛酸半钙盐2mg/L、腐胺盐酸盐0.1mg/L、烟酰胺0.4mg/L、亚硒酸钠0.5mg/L、氯化钴六水合物0.0001mg/L、四水氯化锰0.00001mg/L、六水氯化镍0.00006mg/L、偏硅酸钠0.013mg/L、偏钒酸铵0.05mg/L、钼酸铵四水合物0.00001mg/L和五水硫酸铜0.1mg/L；所述补料培养基A2由水和如下组分组成：L
‑
蛋氨酸1286mg/L、L
‑
苯丙氨酸4652mg/L、L
‑
天冬酰胺8800mg/L、L
‑
脯氨酸4091mg/L、L
‑
赖氨酸5363mg/L、L
‑
亮氨酸7600mg/L、L
‑
天门冬氨酸9200mg...
【专利技术属性】
技术研发人员：李娅娅，鲍勇，田晓平，赵巧辉，李桂林，付光宇，吴学炜，杨增利，
申请(专利权)人：郑州伊美诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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