【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫学检测，尤其涉及一种t4-bsa包被抗原及其制备方法。
技术介绍
1、甲状腺素(thyroxin(e)，thx，t4)是甲状腺滤泡细胞合成及分泌的激素，以游离形式释放入血循环中并迅速与血浆蛋白相结合。甲状腺素又称四碘甲状腺原氨酸，由两个3，5-二碘酪氨酸分子偶联而成的一种碘化的酪氨酸衍生物，是甲状腺的主要激素。有dl,l,d三种构型。未证实其有天然游离态存在，可能为甲状腺球蛋白分裂产品，可从动物甲状腺中提取，或者由3,5-二碘-l-酪氨酸为原料获得。其中l型活性强，d型活性较小。甲状腺素具有促进细胞代谢、增加氧消耗、刺激组织生长、成熟和分化等功能。甲状腺激素产品可作替代药或作生化试剂。l-甲状腺素的生理活性是外消旋体的2倍，d-甲状腺素生理活性很低。因此定量测定人血清ft4对甲状腺疾病的诊断，以及甲状腺的病理、生理研究有重要意义。
2、辣根酶发光系统检测t4的方法一般为竞争法，板式酶免、化学发光以及磁微粒化学发光检测均可用竞争法检测。竞争法模式需要用到包被抗原、标记抗体，用于检测样本中的t4抗体。由于半抗原都是小分子，本身很难具有好的抗原性，只能诱导动物产生很弱的免疫反应，因而将半抗原t4与载体蛋白耦联获得完全抗原对于t4抗体的检测是很重要的。现有技术一般将小分子抗原偶联至牛血清白蛋白(bsa)上获得完全抗原。
3、常规工艺一般用edc两步法制备t4-bsa。但是，用edc两步法制备的t4-bsa在检测t4抗体时与行业标杆产品对比会出现异常样本，可能是因为edc是一种零臂长的交联剂，存在
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种t4-bsa包被抗原及其制备方法。本专利技术制备方法制得的t4-bsa包被抗原用于包被羧基磁珠，反应性较高，且能消除异常样本对检测的影响。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、一种t4-bsa包被抗原的制备方法，包括如下步骤：
4、(a)用癸二酸二(n-琥珀酰亚胺)酯活化bsa后，除去未反应的小分子，获得活化后的bsa；
5、(b)将活化后的bsa与甲状腺素t4混合，反应，加入终止剂淬灭；然后除去未反应的小分子和bsa聚体，获得t4-bsa包被抗原。
6、本专利技术采用一种两端带有nhs、臂长为10个c原子的交联剂(癸二酸二(n-琥珀酰亚胺)酯)作为交联剂制备t4-bsa包被抗原t4-bsa，所得t4-bsa包被抗原一方面解决了空间位阻对二者交联的影响，另一方面，经过分子筛后能够去除bsa聚体，只留下bsa单体偶联不同个数的t4抗原。本专利技术制备的包被抗原解决了异常样本的问题，同时反应性也较edc两步法高。
7、一些实施方案中，步骤(a)中，所述bsa与癸二酸二(n-琥珀酰亚胺)酯的摩尔比为1：10-1：20；具体可为1:10、1:15或1:20。
8、本专利技术中，所述步骤(a)具体为：
9、bsa用磷酸盐缓冲液进行溶解，获得bsa-磷酸盐缓冲液，癸二酸二(n-琥珀酰亚胺)酯用dmso溶解，获得交联剂溶液；
10、将bsa-磷酸盐缓冲液和交联剂溶液进行活化反应，在所述活化反应结束1h内，将反应产物上脱盐柱，去除未反应的小分子癸二酸二(n-琥珀酰亚胺)酯，获得活化后的bsa；
11、所述bsa-磷酸盐缓冲液中bsa的浓度为1-10mg/ml，具体可为1mg/ml、5mg/ml、7mg/ml或10mg/ml；所述交联剂溶液中癸二酸二(n-琥珀酰亚胺)的浓度为5-15mg/ml，具体可为5mg/ml、10mg/ml或15mg/ml。
12、一些实施方案中，步骤(a)中，所述活化的ph为7-9，时间为2-4h，温度为20-30℃。一些具体实施例中，所述活化的条件为：ph为8，时间为2h，温度为25℃，或ph为8，时间为4h，温度为20℃。
13、一些实施方案中，步骤(b)中，所述活化后的bsa与甲状腺素t4的摩尔比为1：5-1：10，具体可为1:5或1:10。
14、一些实施方案中，所述步骤(b)具体为：
15、将活化后的bsa浓缩至5-10mg/ml，t4用dmso溶解成5mg/ml，然后将二者混合进行交联反应，加入终止剂淬灭；依次经脱盐柱、分子筛，去除未反应的小分子和bsa聚体，获得t4-bsa包被抗原。
16、本专利技术对终止剂的具体种类不作特殊限定，可以是本领域常用的种类，包括但不仅限于tris、乙醇胺、甘氨酸、赖氨酸中的至少一种。本专利技术中的一些具体实施例中，所述终止剂为tris。
17、一些实施方案中，步骤(b)中，所述交联反应的ph为7-9，反应时间为10-20h，反应温度为2-8℃。一些具体实施例中，所述反应的条件为：ph为7，时间为20h，温度为4℃，或ph为9，时间为10h，温度为4℃。
18、本专利技术还提供了由以上所述的制备方法制备得到的t4-bsa包被抗原。
19、本专利技术还提供了所述t4-bsa包被抗原在制备检测t4抗体的产品中的应用；其中，所述产品为以t4-bsa包被抗原，基于竞争法检测模式的不同类型的产品，包括酶免、板式发光、磁微粒发光等。
20、本专利技术提供一种检测t4抗体的试剂盒，包括本专利技术所述的t4-bsa包被抗原。
21、本专利技术的有益效果如下：
22、(1)本专利技术制备的t4与bsa之间有一定的臂长，降低了二者交联过程中的空间位阻。交联剂臂长为10个c原子，与bsa偶联后能更好的与抗体结合，减少了小分子抗原偶联bsa后与抗体的位阻，能更好的结合抗体，从而提升反应性。
23、(2)本专利技术制备的t4-bsa终产品只含有bsa单体与t4的偶连物，不含bsa聚体，能使偶联上的t4抗原全部暴露出来，从而有效降低异常样品的出现。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种T4-BSA包被抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述BSA与癸二酸二(N-琥珀酰亚胺)酯的摩尔比为1：10-1：20。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)具体为：
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述活化的pH为7-9，时间为2-4h，温度为20-30℃。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中，所述活化后的BSA与甲状腺素T4的摩尔比为1：5-1：10。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(b)具体为：
7.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中，所述交联反应的pH为7-9，时间为10-20h，温度为2-8℃。
8.根据权利要求1～7任一项所述的制备方法制备得到的T4-BSA包被抗原。
9.权利要求1～7任一项所述的制备方法制得的T4-BSA包被抗原或权利要求8所述的T4-BSA包被抗原在制备检测
10.一种检测T4抗体的试剂盒，其特征在于，包括权利要求8所述的T4-BSA包被抗原。
...【技术特征摘要】
1.一种t4-bsa包被抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述bsa与癸二酸二(n-琥珀酰亚胺)酯的摩尔比为1：10-1：20。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)具体为：
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述活化的ph为7-9，时间为2-4h，温度为20-30℃。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中，所述活化后的bsa与甲状腺素t4的摩尔比为1：5-1：10。...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨丽革，李昕益，高志阳，陈琦，王贝贝，徐延伟，赵巧辉，李桂林，付光宇，杨增利，
申请(专利权)人：郑州伊美诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。