一种提高颗粒细胞增殖活性的物理方法技术

本发明专利技术属于电磁生物学技术领域，更具体地，涉及一种提高颗粒细胞增殖活性的物理方法。将脉冲电磁场作用于颗粒细胞，实验证明能显著提高颗粒细胞的增殖能力。此外，本发明专利技术应用电磁场这一物理疗法，是一种非侵入性技术，大大增加了其应用的安全性和有效性。大大增加了其应用的安全性和有效性。大大增加了其应用的安全性和有效性。

【技术实现步骤摘要】
一种提高颗粒细胞增殖活性的物理方法


[0001]本专利技术属于电磁生物学
，更具体地，涉及一种提高颗粒细胞增殖活性的物理方法。

技术介绍

[0002]卵泡是育龄女性生殖系统的核心功能单位，其发育的最终目的是产生一个可育的卵子，完成受精和胚胎发育的过程。现代社会由于环境因素、精神压力等导致原始卵泡池过早耗竭，从而导致卵巢功能过早衰退，引发卵巢储备功能下降、早发性卵巢功能不全、最终卵巢早衰，严重影响了女性的生殖能力。生育能力的衰退给女性群体带来了沉重的生理和心理负担，故维持卵泡的正常发育对女性生殖尤为重要。卵泡的发育是涉及多种细胞、多个阶段的复杂过程，其中颗粒细胞和卵母细胞是构成卵泡的重要细胞，卵泡的形成需要颗粒细胞与卵母细胞间密切的相互作用。卵母细胞与颗粒细胞通过一系列自分泌或旁分泌的方式调控着卵泡的正常发育。另有研究发现，依赖于连接蛋白介导的间隙连接进行细胞间通讯的旁分泌途径使卵泡得到了良好的生长发育和成熟。在促性腺激素等多种激素和信号分子作用下，颗粒细胞增殖、分化，并通过间隙连接与周围的颗粒细胞、卵母细胞、膜细胞进行物质交换和信号传递，卵母细胞也可分泌多种因子反作用于颗粒细胞。颗粒细胞与卵母细胞间的相互作用涉及多条信号通路，这些信号通路间同样存在相互影响，决定卵泡的成熟或闭锁。当这些信号通路被过度激活或抑制时，可影响细胞因子的生成或传递，从而引起颗粒细胞或卵泡的凋亡。由此可见保持颗粒细胞的增殖活性对卵泡的作用至关重要。
[0003]针对高龄女性因卵巢衰老引起的卵巢储备功能下降，目前临床上的主要解决方案是提倡健康的生活方式、控制体重、心理疏导及避孕和性健康指导等。虽然有一定成效，但这些改善方式难以在靶器官达到确定的治疗效果，只有很低比例的患者达到完全缓解。因此，迫切需要新的提高颗粒细胞增殖活性的策略。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种提高颗粒细胞增殖活性的物理方法。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了一种提高颗粒细胞增殖活性的物理方法，将颗粒细胞置于低频脉冲电磁场中，利用该低频脉冲电磁场对所述颗粒细胞进行刺激，以提高所述颗粒细胞的增殖活性。
[0006]优选地，所述颗粒细胞为卵巢颗粒细胞。
[0007]优选地，所述颗粒细胞为贴壁生长于DMEM完全培养基溶液中的颗粒细胞。
[0008]优选地，所述颗粒细胞为处于对数生长期的颗粒细胞。
[0009]优选地，所述低频脉冲电磁场的频率为0.01～1Hz，磁场强度为1
‑
20mT。
[0010]优选地，所述刺激具体为：将所述颗粒细胞置于所述低频脉冲电磁场中，固定磁场频率0.05～0.5Hz；脉冲次数为2
‑
10次，脉冲周期为0.2
‑
1mS；磁场强度5
‑
15mT；每天刺激一
次，每次刺激持续时间≤30min，优选为10
‑
20分钟，连续1
‑
10天。
[0011]总体而言，通过本专利技术所构思的以上技术方案与现有技术相比，具有以下
[0012]有益效果：
[0013]本专利技术创新性建立颗粒细胞增殖活性改善的新方式。首次将脉冲电磁场应用于颗粒细胞，实验证明低频脉冲电磁场能显著提高颗粒细胞尤其是卵巢颗粒细胞的增殖能力，进而通过一系列自分泌或旁分泌的方式调控着卵泡的正常发育，总体上改善了卵巢储备功能下降的问题。此外，本专利技术应用的是电磁场这一物理疗法，是一种非侵入性技术，大大增加了其应用的安全性和有效性。
附图说明
[0014]图1内容(a)为运用cck8法检测不同浓度梯度DOX诱导细胞衰老过程中的细胞增殖情况，内容(b)为流式Annexin V
‑
FITC/PI凋亡检测其凋亡情况。
[0015]图2为qPCR测定对照组和0.75μM DOX处理组凋亡及衰老相关基因表达情况。
[0016]图3为qPCR测定1/5/10mT/10min三种磁场条件作用下处理组衰老相关基因表达情况。
[0017]图4为本专利技术实施例1采用的多波形磁场发生装置结构示意图。
[0018]图5为本专利技术实施例1采用的脉冲磁场波形示意图。
[0019]图6为不同磁场参数对实施例1衰老KNG颗粒细胞刺激后的活性影响。
[0020]图7为不同颗粒细胞对磁场刺激后活性变化。
具体实施方式
[0021]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0022]脉冲电磁场(pulsed electromagnetic field，PEMF)作为一种无创的物理干预方式，最早用于骨不连和骨折延迟愈合的治疗。PEMF是由电流通过赫尔姆兹线圈所产生的具有脉冲间歇的磁场效应。PEMF装置主要由三部分组成，第一部分为信号发生器，它能够产生具有特定波形和频率的电压信号；第二部分为信号扩大器，它能够产生供应电磁场发生器的电流输出，调节扩大器的输出可以改变场强的大小。第三部分为电磁场发生器，它主要由线圈组成。通过电容和电感的方式，PEMF可无创地作用于生物系统。前者需要将相对电极放置在感兴趣组织周围，并且与皮肤直接接触，而后者则无需接触皮肤。低频脉冲电磁场(low frequency pulsed electromagnetic field，LF
‑
PEMF)作为低频电磁场的代表，是指频率为1～100Hz，峰值磁场<10mT的低频、低强度磁场。近年来被越来越多地应用于神经系统疾病及肿瘤的治疗。暴露于0
‑
300Hz范围内的脉冲电磁场(PEMF)是一种治疗工具，广泛用于治疗多种疾病，包括骨关节炎、帕金森病、术后疼痛和水肿、慢性伤口的治疗，以及通过直接刺激神经和肌肉细胞等可兴奋细胞促进血管舒张和血管生成。经验证发现脉冲电磁场(PEMF)疗法具有一些潜在的优势，包括无创、安全、对非癌细胞没有毒性，以及与其他可用疗法联合使用的可能性。PEMF刺激已经在体外和体内用于各种癌症类型，包括皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌、肝细胞癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、膀胱癌、甲状腺癌和结肠癌。但是尚未发现脉冲电
磁场在调控生殖细胞活性方面的应用可能。
[0023]本专利技术提供的一种提高颗粒细胞增殖活性的物理方法，将颗粒细胞置于低频脉冲电磁场中，利用该低频脉冲电磁场对所述颗粒细胞进行刺激，以提高所述颗粒细胞的增殖活性。
[0024]一些实施例中，所述颗粒细胞为卵巢颗粒细胞，包括但不限于为人卵巢颗粒细胞。
[0025]本专利技术聚焦于逆转颗粒细胞衰老的磁场参数条件。细胞衰老模型根据药理学IC50指标进行构建，即细胞活力下降至原细胞活性的50％时的药物浓度，作为细胞模型的浓度。后续使用SA
‑
β
‑
gal等实验方法说明此药物浓度下本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高颗粒细胞增殖活性的物理方法，其特征在于，将颗粒细胞置于低频脉冲电磁场中，利用该低频脉冲电磁场对所述颗粒细胞进行刺激，以提高所述颗粒细胞的增殖活性。2.如权利要求1所述的物理方法，其特征在于，所述颗粒细胞为卵巢颗粒细胞。3.如权利要求2所述的物理方法，其特征在于，所述颗粒细胞为贴壁生长于DMEM完全培养基溶液中的颗粒细胞。4.如权利要求2所述的物理方法，其特征在于，所述颗粒细胞为处于对数生长期的颗粒细胞。5.如权利要求1所述的物理方法，其特征在于，所述低频脉冲电磁场的频率为0.01～...

【专利技术属性】
技术研发人员：相文佩，李可欣，蔡斯滢，枚巧娟，韩小涛，张玲，李怀标，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：