表达巢蛋白的肾源干细胞或祖细胞制造技术

本发明专利技术涉及一种表达巢蛋白的肾源干细胞或祖细胞、分离该细胞的方法，以及该细胞的用途。本发明专利技术所述的方法包括：提供一种以C57BL/6为遗传背景的巢蛋白-绿色荧光蛋白转基因小鼠模型；饲养小鼠至1周龄或以上，分离肾，用胶原酶IV和胰蛋白酶消化，过滤消化后的细胞悬液，筛除肾结缔组织、肾小管和细胞团块，获得单个细胞；通过流式细胞仪进行分选，收集表达绿色荧光蛋白的荧光强度是阴性对照细胞的荧光强度的10倍或以上的细胞，从而分离出所述表达巢蛋白的肾源干细胞或祖细胞。本发明专利技术提供了根据上述方法分离的肾源干/祖细胞，以及进一步在培养基中培养获得的自我更新和增殖的细胞，并且提供了将这些细胞用于制备治疗肾损伤修复的组合物的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于干细胞与组织工程领域，涉及一种表达巢蛋白(Nestin)的肾源干细胞或祖细胞(Nestin+RSPCs)、分离该肾源干/祖细胞的方法，以及该肾源干/祖细胞的用途。本专利技术特别涉及巢蛋白-绿色突光蛋白(Nestin-Green Fluorescent Protein,Nestin-GPF)转基因小鼠通过流式分选技术分离Nestin+肾源干/祖细胞(Nestin+RSPCs)，并验证其自我更新能力和增殖能力；随后细胞移植到肾缺血损伤动物模型体内，鉴定Nestin+RSPCs在体内的分化特性和损伤修复的功能。
技术介绍
肾源干细胞的研究起步较晚，对其生物学特性的认识有很大局限性。近几年研究报道了成体肾组织分离具有干/祖细胞潜能细胞的方法，但大多数属于回顾性研究，分离得到的细胞很难鉴定是否真正的干细胞。有研究报道发现肾小管(tubules)和肾乳头间质(interstitium of renalpapilla)中的一些低更新率(slow-cycling)的细胞,存在某些干/祖细胞特性(Hong KU,Reynolds SDj Giangreco A, et al. Cla本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离肾源干细胞或祖细胞的方法，其中所述细胞表达巢蛋白，所述方法包括：提供一种以C57BL/6为遗传背景的巢蛋白？绿色荧光蛋白转基因小鼠模型；饲养所述转基因小鼠模型的小鼠至1周龄或以上，分离小鼠肾，用胶原酶IV和胰蛋白酶消化，过滤消化后的细胞悬液，筛除肾结缔组织、肾小管和细胞团块，获得单个细胞，所述细胞产生受巢蛋白增强子控制的增强型绿色荧光蛋白；将上述单个细胞通过流式细胞仪进行分选，用C57B/6小鼠细胞做阴性对照细胞，收集表达绿色荧光蛋白的荧光强度是阴性对照细胞的荧光强度的10倍或以上的细胞，从而分离出所述表达巢蛋白的肾源干细胞或祖细胞。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：项鹏，姜美花，
申请(专利权)人：广东江源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：