【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及利用类转录激活子核酸酶快速基因编辑的方法，具体涉及一种在小鼠细胞中基因定点突变的构建方法。
技术介绍
随着人类基因组计划的完成，后基因组时代的生物研究迫切需要有效的手段来进行基因功能的分析。由于生理和遗传层面同人类较高的一致性，基因敲除小鼠模型成为了破译人类基因功能及寻找人类疾病治疗手段的有力工具。基因打靶技术是构建基因敲除小鼠的主要传统手段。基因打靶就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某 一基因为目的的一项技术。传统基因打靶技术的限制因素之一是周期长且难度大的打靶载体构建过程。其次，由于动物细胞内自发的同源重组发生率只有10_5-10_6，将打靶载体电转入小鼠胚胎干细胞之后，要花费大量时间和人力物力筛选发生目的同源重组的胚胎干细胞。而且ES细胞在体外培养过程中对培养条件要求苛刻，稍有不慎将会引起其不可逆的分化，而使其失去生殖系转移能力，不能在后续操作中产生突变子代。再次，显微注射的ES细胞仅有一定的概率成功整合成为能够形成配子的生殖系细胞。并且要求ES细胞处于良好的生长及未分化的状态。另外，...
【技术保护点】
一种在小鼠胚胎细胞中基因定点突变的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在小鼠目标基因组序列中确定目标靶序列；(2)按所述目标靶序列的顺序，构建能够识别并切割目标基因的TALEN核酸序列；(3)将所述TALEN核酸序列导入小鼠胚胎细胞内；所获得的小鼠胚胎细胞用于体外培养或直接植入母鼠，表达TALEN并切割目标基因组，从而筛选目标基因突变的小鼠。
【技术特征摘要】
1.一种在小鼠胚胎细胞中基因定点突变的构建方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)在小鼠目标基因组序列中确定目标靶序列； (2)按所述目标靶序列的顺序，构建能够识别并切割目标基因的TALEN核酸序列； (3)将所述TALEN核酸序列导入小鼠胚胎细胞内； 所获得的小鼠胚胎细胞用于体外培养或直接植入母鼠，表达TALEN并切割目标基因组，从而筛选目标基因突变的小鼠。2.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述小鼠目标基因组序列包括编码基因的基因组序列、低度重复序列、中度重复序列、高度重复序列、低拷贝序列、基因间的转录活跃序列或非转录序列。3.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述小鼠胚胎细胞包括小鼠单细胞受精卵或多细胞小鼠胚胎。4.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)是将所述...
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