【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种小鼠胚胎腭突体外旋转培养方法,其特征在于,包括下列步骤:(1)将孕13.5天的近交系小鼠脱颈处死,在75%的酒精中浸泡消毒;无菌环境下,取出胚胎,在解剖显微镜下解剖取材,将胚胎上的融合前的腭突组织取出;(2)将腭突组织放置于直径为3cm的培养皿内的微孔滤膜上并加入培养液,并保证滤膜漂浮在培养液表面;将置有腭突组织的培养皿放入旋转培养仪,设定旋转培养仪的转速为30‑40转/分钟;将旋转培养仪放到含有5%的二氧化碳、37℃的培养箱中培养;(3)第一次换液:步骤(2)培养24h后,无菌条件下取出旋转培养仪并更换培养皿中的培养液,加入相同体积和成分的培养液,然后在培养液中额外加入海藻多糖和叶酸,海藻多糖、叶酸、培养液的重量比是3‑4:1‑2:10;同时将旋转培养仪的转速匀速升高到50‑60转/分钟;(4)第二次换液:步骤(3)培养12h后,无菌条件下取出旋转培养仪并更换培养皿中的培养液,加入相同的培养液,然后在培养液中额外加入牛血清白蛋白(BSA)和聚乙二醇,牛血清白蛋白(BSA)、聚乙二醇、培养液的重量比是2‑5:1‑3:10;同时将旋转培养仪的转速降低为20‑25转/分钟;(5)步骤( ...
【技术特征摘要】
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