一种无血清干细胞培养基制造技术

本发明专利技术属于细胞培养基技术领域，具体涉及一种无血清干细胞培养基。本发明专利技术无血清干细胞培养基，包括基础培养基，胰岛素，转铁蛋白，淫羊藿苷，甘氨酰丙氨酸，丙氨酰‑L‑酪氨酸，多聚赖氨酸，维生素E，聚乙烯吡咯烷酮，转化生长因子‑β，还原性谷胱甘肽和碳酸氢钠。本发明专利技术无血清干细胞基能够促进细胞生长和增殖，能够明显地促进干细胞的分化，同时培养增殖后的干细胞对细胞退行性模型的保护作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞培养基
，具体涉及一种无血清干细胞培养基。
技术介绍
诸多研究表明干细胞不仅可以自我更新，在条件合适的情况下能分化成其他功能细胞，因此干细胞有望成为治疗人类疑难疾病的有效手段。然而，干细胞在正常成体组织中含量甚微，在体外如何快速扩增与培养干细胞培养是研究干细胞的作用机制及探索其在治疗人类疾病治疗方法的重要技术。专利申请(CN103243070A)公开了一种干细胞培养基及其应用，所述培养基组分包括有基础培养基、胎牛血清、细胞因子或蛋白多肽、维生素及脂类。其所提供的培养基能够快速扩增干细胞同时又不影响干细胞的潜能，干细胞的扩增速度较常规培养基提高3-5倍，而且能用于培养多种组织的干细胞。但是在干细胞培养的过程中，血清中大量成分复杂的蛋白质，给细胞培养的标准化带来困难，其中复杂的蛋白和多重的细胞因子，会导致本身就容易分化的干细胞生出多种完全不同的细胞表型，而产生多种完全不同的细胞分化趋势，也给细胞培养表达产品分离纯化和结果的重复性带来很大的困难。因此，迫切需要一种成本低、成分明确、简单的的无血清培养基。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种成本低、成分明确、简单的无血清干细胞培养基。为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：一种无血清干细胞培养基，主要由以下成分及其浓度组成：基础培养基1L，胰岛素6-15mg/L，转铁蛋白21-35mg/L，淫羊藿苷0.45-0.55μM，甘氨酰丙氨酸365-850mg/L，丙氨酰-L-酪氨酸1.85-2.15g/L，多聚赖氨酸0.15-0.75mg/L，维生素E0.3-0.5mg/L，聚乙烯吡咯烷酮0.03-0.045mg/L，转化生长因子-β10-30μg/L，还原性谷胱甘肽0.025-0.54mg/L和碳酸氢钠0.45-0.65g/L。进一步，所述无血清干细胞培养基，由以下成分及其浓度组成：DMEM/F121L，胰岛素7.5mg/L，转铁蛋白24.5mg/L，淫羊藿苷0.51μM，甘氨酰丙氨酸765mg/L，丙氨酰-L-酪氨酸1.97g/L，多聚赖氨酸0.34mg/L，维生素E0.32mg/L，聚乙烯吡咯烷酮0.042mg/L，转化生长因子-β19μg/L，还原性谷胱甘肽0.43mg/L和碳酸氢钠0.52g/L。进一步，所述基础培养基为DMEM-L培养基或DMEM/F12培养基。进一步，所述无血清干细胞培养基的制备方法，包括以下步骤：(1)准确称取相应浓度的胰岛素，转铁蛋白，淫羊藿苷，甘氨酰丙氨酸，丙氨酰-L-酪氨酸，多聚赖氨酸，维生素E，聚乙烯吡咯烷酮，转化生长因子-β，还原性谷胱甘肽，溶于温度为20-30℃超纯水中，搅拌至溶解完全，得溶液I；(2)向上述溶液I中加入相应浓度的碳酸氢钠，搅拌均匀，加入1LDMEM/F12培养液，搅拌均匀得溶液II；(3)用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调溶液II的pH至7.2，得溶液III；(4)将溶液III用0.22μm滤膜正压过滤除菌，即得。采用本专利技术的上述无血清干细胞培养基，针对干细胞自身容易生出多种完全不同的细胞表型和多种完全不同的细胞分化趋势的情形，采用上述各功能成分稳定和保持其分化水平；并且可以避免现有技术血清蛋白培养基存在的血清批次间的质量差异，提高细胞培养和试验结果的重复性；并避免血清所带来的外源性污染及血清组分的细胞毒性作用。并且其自身成分相对明确、质量一致且蛋白含量低，有利于提高细胞产品生产的稳定性并使细胞产品易于纯化。与现有技术相比，本专利技术无血清干细胞培养基具有以下优点：(1)利用本专利技术培养基能够使细胞生长延滞期缩短，扩增速度快，细胞平顶期时间延长，有利于细胞生长和增殖。(2)本专利技术培养基可用于培养多种干细胞，包括脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞和脐带血干细胞等。(3)本专利技术培养能够明显地促进干细胞的分化，同时培养增殖后的干细胞对细胞退行性模型的保护作用。附图说明图1：不同细胞培养基中干细胞密度变化；图2：不同细胞培养基中干细胞分化成RPE细胞的比率；图3：实施例1培养基中不同干细胞在细胞退行性模型中感光细胞的变化情况。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术做进一步详细说明。原料来源：DMEM(L)液体：美国Hyclone公司；DMEM/F12液体：Hyclone公司；淫羊藿苷，CAS号：489-32-7；多聚赖氨酸，CAS号：25988-63-0。实施例1一种无血清干细胞培养基一种无血清干细胞培养基，由以下成分及其浓度组成：DMEM/F121L，胰岛素7.5mg/L，转铁蛋白24.5mg/L，淫羊藿苷0.51μM，甘氨酰丙氨酸765mg/L，丙氨酰-L-酪氨酸1.97g/L，多聚赖氨酸0.34mg/L，维生素E0.32mg/L，聚乙烯吡咯烷酮0.042mg/L，转化生长因子-β19μg/L，还原性谷胱甘肽0.43mg/L，碳酸氢钠0.52g/L。培养基制备方法为：(1)准确称取相应浓度的胰岛素，转铁蛋白，淫羊藿苷，甘氨酰丙氨酸，丙氨酰-L-酪氨酸，多聚赖氨酸，维生素E，聚乙烯吡咯烷酮，转化生长因子-β，还原性谷胱甘肽，溶于温度为25℃超纯水中，搅拌至溶解完全，得溶液I；(2)向上述溶液I中加入相应浓度的碳酸氢钠，搅拌均匀，加入1LDMEM/F12培养液，搅拌均匀得溶液II；(3)用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调溶液II的pH至7.2，得溶液III；(4)将溶液III用0.22μm滤膜正压过滤除菌，即得。实施例2一种无血清干细胞培养基一种无血清干细胞培养基，由以下成分及其浓度组成：DMEM-L1L，胰岛素6mg/L，转铁蛋白21mg/L，淫羊藿苷0.45μM，甘氨酰丙氨酸365mg/L，丙氨酰-L-酪氨酸1.85g/L，多聚赖氨酸0.15mg/L，维生素E0.3mg/L，聚乙烯吡咯烷酮0.03mg/L，转化生长因子-β10μg/L，还原性谷胱甘肽0.025mg/L，碳酸氢钠0.45g/L。制备方法与实施例1相似。实施例3一种无血清干细胞培养基一种无血清干细胞培养基，由以下成分及其浓度组成：DMEM-L1L，胰岛素15mg/L，转铁蛋白35mg/L，淫羊藿苷0.55μM，甘氨酰丙氨酸850mg/L，丙氨酰-L-酪氨酸2.15g/L，多聚赖氨酸0.75mg/L，维生素E0.5mg/L，聚乙烯吡咯烷酮0.045mg/L，转化生长因子-β30μg/L，还原性谷胱甘肽0.54mg/L，碳酸氢钠0.65g/L。制备方法与实施例1相似。对比例1一种无血清干细胞培养基一种无血清干细胞培养基，由以下成分及其浓度组成：DMEM/F121L，胰岛素7.5mg/L，转铁蛋白24.5mg/L，淫羊藿苷0.85μM，甘氨酰丙氨酸765mg/L，丙氨酰-L-酪氨酸1.97g/L，多聚赖氨酸0.34mg/L，维生素E0.32mg/L，聚乙烯吡咯烷酮0.042mg/L，转化生长因子-β19μg/L，还原性谷胱甘肽0.43mg/L，碳酸氢钠0.52g/L。制备方法与实施例1相似。与对实施例1区别在于，淫羊藿苷的浓度增加至0.85μM。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种无血清干细胞培养基，其特征在于，主要由以下成分及其浓度组成：基础培养基1L，胰岛素6‑15mg/L，转铁蛋白21‑35mg/L，淫羊藿苷0.45‑0.55μM，甘氨酰丙氨酸365‑850mg/L，丙氨酰‑L‑酪氨酸1.85‑2.15g/L，多聚赖氨酸0.15‑0.75mg/L，维生素E 0.3‑0.5mg/L，聚乙烯吡咯烷酮0.03‑0.045mg/L，转化生长因子‑β10‑30μg/L，还原性谷胱甘肽0.025‑0.54mg/L和碳酸氢钠0.45‑0.65g/L。

【技术特征摘要】
1.一种无血清干细胞培养基，其特征在于，主要由以下成分及其浓度组成：基础培养基1L，胰岛素6-15mg/L，转铁蛋白21-35mg/L，淫羊藿苷0.45-0.55μM，甘氨酰丙氨酸365-850mg/L，丙氨酰-L-酪氨酸1.85-2.15g/L，多聚赖氨酸0.15-0.75mg/L，维生素E0.3-0.5mg/L，聚乙烯吡咯烷酮0.03-0.045mg/L，转化生长因子-β10-30μg/L，还原性谷胱甘肽0.025-0.54mg/L和碳酸氢钠0.45-0.65g/L。2.根据权利要求1所述无血清干细胞培养基，其特征在于，由以下成分及其浓度组成：DMEM/F121L，胰岛素7.5mg/L，转铁蛋白24.5mg/L，淫羊藿苷0.51μM，甘氨酰丙氨酸765mg/L，丙氨酰-L-酪氨酸1.97g/L，多聚赖氨酸0.34mg/L，维生素E0.32mg/L，聚乙烯吡...

【专利技术属性】
技术研发人员：严志海，
申请(专利权)人：严志海，
类型：发明
国别省市：广东;44