一种毛囊干细胞的无血清培养基及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种毛囊干细胞的无血清培养基及其制备方法，该培养基由低糖DMEM 基础培养基和添加成份组成，所述添加成份及其含量如下：血清替代物5‑10％ (v/v)、胎球蛋白 0.1‑5mg/ml、维生素C 35‑80ng/ml、L‑谷氨酰胺1.5‑5mmol/ml、表皮生长因子1‑20ng/ml、葡萄糖 5‑15μM、2‑巯基乙醇25‑120μM、青链霉素双抗溶液2‑15μM。采用该无血清培养基体外培养时，毛囊干细胞大量快速增长，且生长稳定，纯度高，且该无血清培养基的制备方法简单，保留了培养基中各组分的有效活性。

【技术实现步骤摘要】
一种毛囊干细胞的无血清培养基及其制备方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种毛囊干细胞的无血清培养基及其制备方法。
技术介绍
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，可以分化成多种功能细胞。头发毛囊中含有大量干细胞，是最容易获得的干细胞来源之一。毛囊干细胞是一类存在于毛囊外根鞘隆突部的干细胞，具有未分化性、自我更新和体外增殖能力强等特点。体外培养研究中的毛囊干细胞表现出高克隆形成能力，具有很高的再生潜能。由于毛囊干细胞来源于毛发，可以直接从人体自身取得，数量极其丰富，且没有任何并发症，对人完全无创，现已成为皮肤组织工程学研究的焦点。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种毛囊干细胞的无血清培养基及其制备方法，采用该无血清培养基体外培养时，毛囊干细胞大量快速增长，且生长稳定，纯度高，且该无血清培养基的制备方法简单，保留了培养基中各组分的有效活性。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种毛囊干细胞的无血清培养基，由低糖DMEM基础培养基和添加成份组成，所述添加成份及其含量如下：血清替代物5-10％(v/v)胎球蛋白0.1-5mg/ml维生素C35-80ng/mlL-谷氨酰胺1.5-5mmol/ml表皮生长因子1-20ng/ml葡萄糖5-15μM2-巯基乙醇25-120μM青链霉素双抗溶液2-15μM。胎球蛋白，发现于胎牛血清，两条肽链自同一前体切割产生并以一对二硫键相连，含量占总蛋白质的45%，等电点较低，含糖量达35%，有3条寡糖链，由分子质量不等的糖蛋白组成，具有细胞所需的生长因子，促进细胞胞吞等功能。维生素C是大部分生物的必需营养，是一种抗氧化剂，保护细胞组织免于自由基的威胁。L-谷氨酰胺在细胞培养时起到很重要的作用。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢；在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。表皮生长因子是一种小肽，由53个氨基酸残基组成，是一种多功能的生长因子，在体内体外都对多种组织细胞有强烈的促分裂作用。葡萄糖是活细胞的能量来源和新陈代谢中间产物，即生物的主要供能物质。2-巯基乙醇是一种有机化合物，其化学式为HOCH2CH2SH，它兼具乙二醇（HOCH2CH2OH）和乙二硫醇（HSCH2CH2SH）的官能团，通常用于二硫键的还原，保护二硫键，从而使蛋白质不被氧化掉而失活。青链霉素双抗溶液用于抑制细菌增长，为干细胞提供无菌的生长环境。本专利技术的毛囊干细胞的无血清培养基的有益效果在于：青链霉素双抗溶液抑制了培养基内的细菌增长，为毛囊干细胞提供无菌的生长环境；维生素C和2-巯基乙醇构建了一个良好的毛囊干细胞分裂环境，防止毛囊干细胞在生长的过程中干细胞的组分被氧化而失掉活性；表皮生长因子促进了的毛囊干细胞分裂生长，胎球蛋白、维生素C、L-谷氨酰胺及葡萄糖为毛囊干细胞的生长提供足够的能量，使新生的细胞具有活性；采用本专利技术的无血清培养基体外培养毛囊干细胞，毛囊干细胞可快速增长，且生长稳定，纯度高。优选的，添加成份及其含量如下：血清替代物6-10％(v/v)胎球蛋白0.5-5mg/ml维生素C40-80ng/mlL-谷氨酰胺1.5-5mmol/ml表皮生长因子5-20ng/ml葡萄糖8-15μM2-巯基乙醇50-120μM青链霉素双抗溶液5-15μM。优选的，添加成份及其含量如下：血清替代物6％(v/v)胎球蛋白0.5mg/ml维生素C40ng/mlL-谷氨酰胺2mmol/ml表皮生长因子5ng/ml葡萄糖8μM2-巯基乙醇50μM青链霉素双抗溶液5μM。优选的，添加成份及其含量如下：血清替代物8％(v/v)胎球蛋白3mg/ml维生素C70ng/mlL-谷氨酰胺4mmol/ml表皮生长因子15ng/ml葡萄糖12μM2-巯基乙醇100μM青链霉素双抗溶液10μM。一种毛囊干细胞的无血清培养基的制备方法，包括以下步骤：在无菌超净工作台中，取适量低糖DMEM基础培养基，按上述成份含量加入血清替代物、胎球蛋白、维生素C、L-谷氨酰胺、表皮生长因子、葡萄糖、2-巯基乙醇及青链霉素双抗溶液，吹打混匀，过滤除菌即获得毛囊干细胞的无血清培养基。优选的，过滤除菌为采用0.1～0.22μm孔径的微孔滤膜正压过滤除菌，采取正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染的特点，避免胎球蛋白产生大量气泡及避免L-谷氨酰胺失去有效性。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。实施例1本实施例的一种毛囊干细胞的无血清培养基，由低糖DMEM基础培养基和添加成份组成，所述添加成份及其含量如下：血清替代物5％(v/v)胎球蛋白0.1mg/ml维生素C35ng/mlL-谷氨酰胺1.5mmol/ml表皮生长因子1ng/ml葡萄糖5μM2-巯基乙醇25μM青链霉素双抗溶液2μM。实施例2本实施例的一种毛囊干细胞的无血清培养基，由低糖DMEM基础培养基和添加成份组成，所述添加成份及其含量如下：血清替代物6％(v/v)胎球蛋白0.5mg/ml维生素C40ng/mlL-谷氨酰胺2mmol/ml表皮生长因子5ng/ml葡萄糖8μM2-巯基乙醇50μM青链霉素双抗溶液5μM。实施例3本实施例的一种毛囊干细胞的无血清培养基，由低糖DMEM基础培养基和添加成份组成，所述添加成份及其含量如下：血清替代物7％(v/v)胎球蛋白1mg/ml维生素C50ng/mlL-谷氨酰胺3mmol/ml表皮生长因子10ng/ml葡萄糖10μM2-巯基乙醇80μM青链霉素双抗溶液8μM。实施例4本实施例的一种毛囊干细胞的无血清培养基，由低糖DMEM基础培养基和添加成份组成，所述添加成份及其含量如下：血清替代物8％(v/v)胎球蛋白3mg/ml维生素C70ng/mlL-谷氨酰胺4mmol/ml表皮生长因子15ng/ml葡萄糖12μM2-巯基乙醇100μM青链霉素双抗溶液10μM。实施例5本实施例的一种毛囊干细胞的无血清培养基，由低糖DMEM基础培养基和添加成份组成，所述添加成份及其含量如下：血清替代物10％(v/v)胎球蛋白5mg/ml维生素C80ng/mlL-谷氨酰胺5mmol/ml表皮生长因子20ng/ml葡萄糖15μM2-巯基乙醇120μM青链霉素双抗溶液15μM。制备方法实施例1至5的毛囊干细胞的无血清培养基的制备方法，包括以下步骤：在无菌超净工作台中，取适量低糖DMEM基础培养基，分别按实施例1至5所述的成份含量加入血清替代物、胎球蛋白、维生素C、L-谷氨酰胺、表皮生长因子、葡萄糖、2-巯基乙醇及青链霉素双抗溶液，吹打混匀，采用0.22μm孔径的微孔滤膜正压过滤除菌即获得毛囊干细胞的无血清培养基。对照试验取适量人体毛发，在室温下，用消化液消化，待成纤维细胞脱落后，洗掉成纤维细胞，获得毛囊干细胞群，将毛囊干细胞群置于37°培养瓶，加入实施例1至本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种毛囊干细胞的无血清培养基，其特征在于：由低糖DMEM 基础培养基和添加成份组成，所述添加成份及其含量如下：血清替代物5‑10％ (v/v)胎球蛋白 0.1‑5mg/ml维生素C 35‑80ng/mlL‑谷氨酰胺1.5‑5mmol/ml表皮生长因子1‑20ng/ml葡萄糖 5‑15μM2‑巯基乙醇25‑120μM青链霉素双抗溶液2‑15μM。

【技术特征摘要】
1.一种毛囊干细胞的无血清培养基，其特征在于：由低糖DMEM基础培养基和添加成份组成，所述添加成份及其含量如下：血清替代物5-10％(v/v)胎球蛋白0.1-5mg/ml维生素C35-80ng/mlL-谷氨酰胺1.5-5mmol/ml表皮生长因子1-20ng/ml葡萄糖5-15μM2-巯基乙醇25-120μM青链霉素双抗溶液2-15μM。2.根据权利要求1所述的一种毛囊干细胞的无血清培养基，其特征在于：所述添加成份及其含量如下：血清替代物6-10％(v/v)胎球蛋白0.5-5mg/ml维生素C40-80ng/mlL-谷氨酰胺1.5-5mmol/ml表皮生长因子5-20ng/ml葡萄糖8-15μM2-巯基乙醇50-120μM青链霉素双抗溶液5-15μM。3.根据权利要求1所述的一种毛囊干细胞的无血清培养基，其特征在于：所述添加成份及其含量如下：血清替代物6％(v/v)胎球蛋白0.5mg/ml维生素C40ng/mlL-谷...

【专利技术属性】
技术研发人员：张严冬，谢海涛，李相鲁，聂广军，
申请(专利权)人：广东万海细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44