一种人母乳干细胞的制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种人母乳干细胞的制备方法及其应用，其中的制备方法包括以下步骤：采集母乳；分离人母乳细胞，得到纯化后的母乳细胞悬液；将纯化后的母乳细胞悬液转移到包被体积百分比为0.01‑0.05%的明胶的培养板中，置于CO

【技术实现步骤摘要】
一种人母乳干细胞的制备方法及其应用
本专利技术属于细胞生物学
，尤其涉及一种人母乳干细胞的制备方法及其应用。
技术介绍
干细胞是指那些具有自我复制和多向分化能力的细胞，它们可以不断地自我更新，并在特定条件下分化成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞。利用干细胞移植受损组织，可使组织恢复再生能力，修复其功能，干细胞替代疗法为治疗各种疾病和组织损伤带来了巨大的希望。干细胞存在于胚胎、成熟机体组织、血液中，近年来研究发现，人母乳中也含有干细胞成分，母乳干细胞表现出类似人胚胎干细胞的多向分化潜能，可表达多种多能性基因，如OCT4、SOX2、NANOG等，这些基因对于维持细胞未分化状态和多能性有着非常重要的作用。人母乳干细胞具有很多天然优势：可通过无创方式获取，哺乳期女性均可提供，来源丰富。因此，人母乳干细胞可作为细胞替代疗法稳定且丰富的来源。目前关于人母乳干细胞制备方法的文献资料较少，尚未有公知的获得认可的标准化制备方法。根据目前的文献报道，人母乳干细胞的培养多采用添加10%-20%胎牛血清的DMEM或RPMI培养基，在此基础上，有些研究学者添加了胰岛素、表皮生长因子等物质，有些研究学本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人母乳干细胞的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤S1：采集母乳；步骤S2：分离人母乳细胞，得到纯化后的母乳细胞悬液；步骤S3：将纯化后的母乳细胞悬液转移到包被体积百分比为0.01‑0.05%的明胶的培养板中，置于CO

【技术特征摘要】
1.一种人母乳干细胞的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤S1：采集母乳；步骤S2：分离人母乳细胞，得到纯化后的母乳细胞悬液；步骤S3：将纯化后的母乳细胞悬液转移到包被体积百分比为0.01-0.05%的明胶的培养板中，置于CO2培养箱中培养，每天换液1次，第6天分离单个细胞克隆并接种到超低粘附培养板中，促进克隆形成；步骤S4：当细胞融合至80%以上时，添加胰蛋白酶，胰蛋白酶覆盖细胞表面即可，37℃消化5min，用2倍体积含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基终止消化，1000rpm离心10min，收集细胞沉淀，用PBS缓冲液洗涤1次，1000rpm离心10min，用新鲜的细胞培养液重悬细胞，按1:3传代。2.根据权利要求1所述的人母乳干细胞的制备方法，其特征在于：步骤S4中，所述细胞培养液的成分为：含10%KOSR、10-20ng/mL碱性成纤维细胞生长因子、10-20ng/mL表皮细胞生长因子、100-300U/mL白血病抑制因子、含有0.1-0.5μmol/mL视黄醇的DMEM/F12培养基。3.根据权利要求2所述的人母乳干细胞的制备方法，其特征在于：所述细胞培养液的成分为：含10%KOSR、12-15ng/mL碱性成纤维细胞生长因子、12-18ng/mL表皮细胞生长因子、150-250U/mL白血病抑制因子、含有0.2-0.4μmol/mL视黄醇的DMEM/F12培养基。4.根据权利要求2所述的人母乳干细胞的制备方法，其特征在于：所述细胞培养液的成分为：含10%KOSR、10ng/mL碱性成纤维细胞生长因子、20ng/mL表皮细胞生长因子、100...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜舒，张芸，纪惜銮，杨顺，罗朝霞，
申请(专利权)人：深圳市茵冠生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44