利用多能干细胞制备神经前体细胞的方法技术

本发明专利技术涉及利用多能干细胞制备神经前体细胞的方法。首次揭示一种可显著提高多能干细胞向神经前体细胞分化效率的方法，通过采用组蛋白去乙酰化酶抑制剂作为诱导剂来提高多能干细胞分化为神经前体细胞的效率。此外，还揭示了通过在多能干细胞中下调HDAC3或SMRT的表达或活性的方式来提高分化效率的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，更具体地，本专利技术涉及利用多能干细胞制备神经前体细胞的方法。
技术介绍
人多能干细胞(hPSCs；包括人胚胎干细胞hESCs和人诱导多能干细胞hiPSCs)是研究各种疾病尤其是神经退行性疾病的良好模型。由其分化的神经前体能够进一步分化为神经元和胶质细胞，对神经退行性疾病的疾病机制研究，药物筛选及疾病标志物的筛查，细胞移植治疗有很重要的作用。目前人多能干细胞的神经分化方法主要有三种：第一种方法是类胚体(embryoidbody，EB)诱导。将培养的hESC或hiPSC消化为团块悬浮培养将形成EB。EB包含三个胚层的细胞，具有向各类细胞继续分化的能力。EB贴壁培养，逐渐会出现神经花环结构(rosette)的细胞团，将这类细胞挑出继续培养，则可得到神经前体。这些神经前体可增殖，并能向神经元，胶质细胞分化。在特定因子的诱导下可分化为特定类型的神经元。EB诱导方法的缺点是神经元分化效率低，EB的形成效率依赖于细胞状态，并不是每株细胞每次分化都能获得很多EB。而且EB包涵三个胚层的细胞，最后挑出的神经花环也是神经类细胞和胶质本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备神经前体细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)以维甲酸和组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导培养多能干细胞，获得神经球；和(2)培养(1)获得的神经球使之成熟，获得神经前体细胞。

【技术特征摘要】
1.一种制备神经前体细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)以维甲酸和组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导培养多能干细胞，获得神经
球；和
(2)培养(1)获得的神经球使之成熟，获得神经前体细胞。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的组蛋白去乙酰化酶抑
制剂包括：丁酸钠，丙戊酸钠或MGCD0103或其组合。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，
丁酸钠的用量是：50μM-1mM；
丙戊酸钠的用量是50μM-3mM；
MGCD0103的用量是0.1-3μM。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，维甲酸的用量是2-50μM。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中还包括：从培养物
中分离出神经前体细胞。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)包括：将多能干细胞
处理成500-1000个细胞的小克隆，以添加了维甲酸和组蛋白去乙酰化酶抑制
剂的干细胞维持培养基进行贴壁培养，培养时间为7±2天。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)包括：将步骤(1)的细
胞处理成含500-1000个细胞的团块，在神经球培养液中进行悬浮培养11±2
天。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的多能干细胞包括：胚
胎干细胞或诱导多能干细胞。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)之前，还包括：在
所述的多能干细胞中降低HDAC3或SMRT的表达或活性。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，利用RNA干扰的方法降低
HDAC3或SMRT的表达。
11.一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂的用途，用于诱导多能干细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：乐卫东，杨娟，唐宇，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31