本发明专利技术涉及一种预处理细胞，特别涉及一种Adjudin预处理干细胞及其制备方法和应用。Adjudin预处理干细胞的制备方法，其步骤包括，浓度为5‑30μmol/L的Adjudin溶液预处理干细胞,然后放入细胞培养箱中，35‑39℃孵育20‑30小时即可。所述干细胞为神经干细胞、骨髓间充质干细胞或内皮祖细胞。本发明专利技术提供了Adjudin预处理干细胞，通过实验表明Adjudin预处理后，神经干细胞和骨髓间充质干细胞在损伤部位的存活率显著提高，死亡率下降，从而提高了干细胞移植的治疗效果，可应用于在干细胞移植治疗中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种预处理细胞，特别涉及一种Adjudin预处理干细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
包括神经干细胞(NSC)、间充质干细胞(MSC)、内皮祖细胞(EPC)在内的干细胞对于脑损伤，脊髓损伤等各种疾病中具有较好的应用前景。尽管如此，仍有许多问题尚未解决，如干细胞存活率低，从而导致干细胞移植治疗效果差，以及长期来看，干细胞移植安全性等问题。Adjudin，又名AF-2364，现有技术中，Adjudin是作为男性避孕药被发现，是化疗药氯尼达明(lonidamine)的衍生物，是一类具有吲哚酸结构的小分子药物。Adjudin的化学机构式是：现有技术中，未有研究证实，Adjudin可应用于提高干细胞存活率中。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种Adjudin预处理干细胞，经过Adjudin预处理后，能提高干细胞在损伤部位的存活率进而通过干细胞分化进行治疗，有效提高了干细胞移植治疗效果。本专利技术的另一个目的是提供一种Adjudin预处理干细胞的制备方法。本专利技术的目的，通过以下技术方案实现：一种Adjudin预处理干细胞的制备方法，其步骤包括，5-30μmol/L的Adjudin溶液预处理干细胞，然后放入细胞培养箱中，35-39℃孵育20-30小时即可。优选的，10-20μmol/L的Adjudin溶液预处理干细胞，然后放入细胞培养箱中，37℃孵育24小时。进一步优选的，Adjudin溶液的浓度为10μmol/L。所述干细胞为神经干细胞、骨髓间充质干细胞或内皮祖细胞。通过上述制备方法可获得Adjudin预处理干细胞。上述Adjudin预处理干细胞在干细胞移植治疗中的应用。本专利技术的有益效果为：本专利技术提供了Adjudin预处理干细胞，通过实验表明Adjudin预处理后，神经干细胞和骨髓间充质干细胞在损伤部位的存活率显著提高，死亡率下降，从而提高了干细胞移植的治疗效果。附图说明图1是实施例1中，Adjudin预处理神经干细胞的存活率对比图。图2是实施例2中，Adjudin预处理骨髓间充质干细胞的存活率对比图。图3是实施例3中，Adjudin预处理神经干细胞移植治疗效果对比图。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术作进一步说明：Adjudin溶液的配制方法为：Adjudin为粉末状制剂，将Adjudin溶解在DMSO中(或乙醇等溶剂)，配成30mmol/L的stock溶液(储存浓度)保存，使用时按照需要的浓度用培养液稀释到终浓度。实施例1小鼠神经干细胞：取孕14.5天的孕鼠中的胎鼠，取脑，分离皮层之后消化成单细胞悬液，用NSC完全培养液培养。将小鼠神经干细胞分别放入浓度为10及30μmol/L的Adjudin溶液中，然后放入细胞培养箱中，37℃孵育24小时，然后将神经干细胞在0.1mmol/L的双氧水刺激1小时，之后再换成正常培液培养24小时，进行CCK-8检测。将CCK-8试剂以每孔10微升的量加入待测的96孔板细胞培养液中；37℃孵育1.5小时，用酶标仪测定450纳米波长处的吸光光度值。小鼠神经干细胞在双氧水刺激后存活率显著下降，而这一现象可以由10μmol/L和30μmol/L的Adjudin预处理后得到明显缓解，说明Adjudin预处理后，提升了神经干细胞的存活率，优选的是浓度为10μmol/L的Adjudin溶液预处理，在合理的用量浓度内，效果显著。结果见图1所示。实施例2人源骨髓间充质干细胞：取人骨髓，PBS冲洗，离心，得到细胞沉淀，再用PBS重悬离心，反复两次后，用含有10％血清的DMEM培养。将骨髓间充质干细胞分别放入浓度为5、10及20μmol/L的Adjudin溶液中，然后放入细胞培养箱中，37℃孵育24小时，然后在将骨髓间充质干细胞在0.05mmol/L的双氧水刺激后存活率显著下降，而这一现象可以由10μmol/L的Adjudin溶液预处理后得到明显缓解，说明Adjudin预处理后，提升了骨髓间充质干细胞的存活率，结果见图2所示。实施例31、动物操作本实施例中研究所使用的小鼠为雄性ICR小鼠。所有的给药方式均为Adjudin预处理神经干细胞，再将其定位注射打入小鼠纹状体。3d后牺牲小鼠，取脑。2、脑组织冰冻切片小鼠麻醉后，进行生理盐水心脏灌注，然后取脑，取出的脑组织置于-80℃预冷的异戊烷中冷冻，然后用铝箔纸包裹，冻存于-80℃冰箱。3、焦油紫染色在室温风干脑片后，用焦油紫染色，当梗死侧与周围组织颜色对比较大时停止染色，冲去片子上多余的染料。晾干后扫描。小鼠造模后在纹状体定位注射Adjudin预处理的神经干细胞，造模后，小鼠脑梗死明显，移植干细胞后梗死面积减少，经过Adjudin预处理的神经干细胞相比未处理的神经干细胞对于脑梗死面积的减少效果更为明显。结果见图3，其中,图A为造模后对照组和实验组小鼠脑梗死体积示意图,图B为脑梗死体积示意图。所有数据按照平均值+标准差的方式给出。数据使用单因素方差分析进行评估，然后使用Student-Newman-Keulsposthoctest。P值小于0.05认为是统计学显著的。综上所述，Adjudin(AF-2364)预处理干细胞的存活率明显上升，从而显著加强在损伤后干细胞移植的治疗效果。以上所述为本专利技术的较佳实施例而已，但本专利技术不应该局限于该实施例所公开的内容。所以凡是不脱离本专利技术所公开的精神下完成的等效或修改，都落入本专利技术保护的范围。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种Adjudin预处理干细胞的制备方法，其步骤包括，5‑30μmol/L的Adjudin溶液预处理干细胞，然后放入细胞培养箱中，35‑39℃孵育20‑30小时即可。
【技术特征摘要】
1.一种Adjudin预处理干细胞的制备方法，其步骤包括，5-30μmol/L的Adjudin溶液预处理干细胞，然后放入细胞培养箱中，35-39℃孵育20-30小时即可。2.根据权利要求1所述的Adjudin预处理干细胞的制备方法，其特征在于，10-20μmol/L的Adjudin溶液预处理干细胞，然后放入细胞培...
【专利技术属性】
技术研发人员：夏伟梁，张婷婷，杨霄，刘腾远，耿可依，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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