从脂肪来源间充质干细胞制备诱导多能干细胞的方法及利用该方法制备的诱导多能干细胞技术

本发明专利技术涉及包含腔昆布(Ecklonia cava)提取物的诱导多能干细胞(induced pluripotency stem cell)重编程用培养基组合物。并且，本发明专利技术涉及利用上述培养基组合物的诱导多能干细胞的制备方法。若利用本发明专利技术的培养基组合物，则可通过利用脂肪来源间充质干细胞来安全并简单地有效制备诱导多能干细胞，所制备的多能干细胞可分化成多种细胞，因此，可用作细胞治疗剂。

Method for preparing induced pluripotent stem cells from adipose derived mesenchymal stem cells and induced pluripotent stem cells prepared by the method

The present invention relates to a cavity containing kelp (Ecklonia cava) extract induced pluripotent stem cells (induced pluripotency stem cell) medium composition for reprogramming. In addition, the invention relates to a method for preparing induced pluripotent stem cells by using the culture medium composition. If the use of medium compositions of the present invention, it can be through the use of adipose derived mesenchymal stem cells to safe and simple and efficient preparation of induced pluripotent stem cells, the preparation of pluripotent stem cells can differentiate into a variety of cells, therefore, can be used as a therapeutic agent for cell.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及来源于人体脂肪的间充质干细胞的多能干细胞诱导培养基组合物及利用其来制备患者特异性诱导多能干细胞的方法。
技术介绍
干细胞是从各个组织获得的被分化之前步骤的未分化细胞的总称。干细胞具有可在未分化状态下在规定期间内持续制造出与自身相同的细胞的性质以及在适当的条件下可分化成构成生物组织的各种细胞的性质。根据分化能力和生成时期，干细胞可分为胚胎干细胞(embryonicstemcell)和成体干细胞(adultstemcell)。其他分类基于干细胞的分化能力，上述干细胞可分为多能(pluripotency)干细胞、多分化能(multipotency)干细胞及单分化能(unipotency)干细胞。成体干细胞可分为多分化能或单分化能干细胞。具有代表性的成体干细胞为间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)和造血干细胞(hematopoieticstemcells，HSCs)。间充质干细胞分化成软骨细胞(chondrocyte)、成骨细胞(osteoblast)、脂肪细胞(adipocyte)、肌肉细胞(myocyte)、神经细胞(neuron)，造血干细胞分化成红细胞、白细胞、血小板等主要血液内的血细胞。相反，多能干细胞均可被分化成构成生物体的三种胚层(germlayer)，由此，多能干细胞是指具有均可分化成人体的所有细胞或脏器组织的多功能性的干细胞，通常，多功能干细胞为胚胎细胞。人类胚胎干细胞来源于可变为人类生命体的胚胎，因此存在多种伦理问题，但是，与成体干细胞相比，人类胚胎干细胞具有优秀的细胞增殖及分化能力。成体干细胞可从骨髓、血液、大脑、皮肤等获得，因此存在很少的伦理问题，但是，与胚胎干细胞相比，成体干细胞具有限定的分化能力。为了解决上述问题，进行了用于通过使来源于成体的细胞重编程来制备与胚胎细胞类似的特异性多功能细胞的多种方法。作为代表性方法，具有细胞融合法(fusionwithEScell)、体细胞核移植法(somaticcellnucleartransfer)、特定因子注入法(reprogrammingbygenefactor)等。细胞融合法因诱导的细胞还具有两对基因，由此在细胞的稳定性方面存在问题，体细胞核移植法存在需要大量卵子且效率极低的问题。而且，特定因子注入法是为了通过插入特定基因来诱导重编程而利用包含致癌基因的病毒的方法，上述方法存在高的致癌危险，且因低效率和方法方面上的难度，而在细胞治疗剂开发可能性方面存在问题。为了成功且大量获得多能干细胞，在培养分离的来源于脐带的单核细胞的步骤中的培养组合物极为重要，且需要进行通过高效率的诱导方法，以更多的量制备多能干细胞的研究。另一方面，曾有过将腔昆布使用于治疗或预防过敏性疾病的组合物(韩国公开专利第2009-0043115号)或者氧化染色用染毛剂组合物(韩国公开专利第2012-0126148号)的情况，但尚未以用于将脂肪来源间充质干细胞(adipose-derivedmesenchymalstemcell)重编程为诱导多能干细胞(inducedpluripotencystemcell)的用途来使用。通过上述
技术介绍
说明的事项仅是为了进一步理解本专利技术的背景，上述
技术介绍
相当于本专利技术所属
的普通技术人员所知道的现有技术。
技术实现思路
技术问题本专利技术人员为了安全性和生产效率高的细胞治疗剂开发的实用化，而寻找以高效率诱导多能干细胞的方法。结果，在向细胞培养基添加作为安全的天然提取物的腔昆布提取物的情况下，确认了可利用脂肪来源间充质干细胞安全且高效地制备诱导多能干细胞，由此完成了本专利技术。因此，本专利技术的目的在于，提供用于将包含腔昆布提取物的脂肪来源间充质干细胞重编程为诱导多能干细胞的培养基组合物。本专利技术的再一目的在于，提供包括在包含腔昆布提取物的培养基中，将脂肪来源间充质干细胞重编程为诱导多能干细胞的步骤的诱导多能干细胞的制备方法。本专利技术的另一目的在于，提供通过上述诱导多能干细胞的制备方法来制备的诱导多能干细胞。本专利技术的还有一目的在于，提供包含从患者的脂肪分离干细胞并通过上述诱导多能干细胞的制备方法来制备的诱导多能干细胞的患者特异性细胞治疗用组合物。通过下述的具体实施方式、专利技术要求保护范围及附图更加明确本专利技术的其他目的及优点。解决问题的方案根据本专利技术的一实施方式，本专利技术提供用于将包含腔昆布(Eckloniacava)提取物的脂肪来源间充质干细胞重编程为诱导多能干细胞培养基组合物。本专利技术人努力寻找在没有破坏胚胎的伦理问题并不使用病毒的情况下，以高效率诱导用于在形成癌细胞方面没有危险的安全性和生产效率高的细胞治疗剂开发的实用化的多能干细胞的方法。结果，向细胞培养基添加作为安全的天然提取物的腔昆布提取物的情况下，确认了可高效制备诱导多能干细胞。作为有效成分包含在本专利技术的培养基组合物的腔昆布(甘苔)为主要在南海岸、济州岛海岸一代及郁陵岛海岸一代栖息的褐藻植物昆布目昆布科的多年生海藻类，主要为鲍鱼和海螺等的食物，且为制备褐藻酸或碘化钾的主要原料或用于食用。本专利技术所包含的腔昆布提取物可利用水、(a)碳数1～4的无水或含水低级乙醇(甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、正丙醇、异丙醇及正丁醇等)、(b)上述低级乙醇和水的混合溶剂、(c)丙酮、(d)乙酸乙酯、(e)氯仿、(f)1，3-丁二醇、(g)己烷、(h)二乙醚等的有机溶剂来提取，优选地，可利用甲醇或乙醇和水和混合溶剂或者利用它们中的各个来提取。在利用混合溶剂提取腔昆布提取物的情况下，优选地，甲醇或乙醇的含量为50～80v/v％。目前，用于将上述腔昆布提取物适用于化妆品等皮肤组合物的事例子在增加(参照韩国公开专利第2013-0017159号、第2012-0040488号、第2010-0097293号)，但尚未有过将上述腔昆布提取物开发成多能干细胞诱导用培养的事例。本专利技术所使用的术语“胚胎干细胞”作为从受精后繁殖初期的胚泡(blastocyst)的内细胞团(innercellmass)分离并培养的细胞，是指具有多能性的细胞。本专利技术所使用的术语“多能干细胞”为具有可分化成构成生物体的三种胚层，即，内胚层(endoderm)、中胚层(mesoderm)、外胚层(ectoderm)的多能性的干细胞。本专利技术所使用的术语“分化(differentiation)”是指在细胞分裂增殖并成长的期间，结构或功能相互特殊化的现象，即，生物的细胞、组织等为了执行各自所负责的任务而发生形态或功能变化。本专利技术所使用的术语“细胞治疗剂”为通过从人分离、培养及特殊操作制备的细胞及组织，细胞治疗剂作为用于治疗、诊断及预防的医药品，为了使细胞或组织的功能恢复，在体外增殖或筛选同种或异种细胞，或者用于通过以其他方法改变细胞的生物学特性等一系列的行为来进行治疗、诊断及预防的医药品。根据细胞的分化程度，细胞治疗剂大体分为体细胞治疗剂、干细胞治疗剂，尤其，本专利技术涉及干细胞治疗剂。本专利技术的“间充质干细胞”为从来源于哺乳动物的胚胎干细胞或成体干细胞分离的细胞，优选地，间充质干细胞为脂肪来源间充质干细胞，更加优选地，间充质干细胞为来源于人体的脂肪的间充质干细胞。上述脂肪来源干细胞可从人体的脂肪组织提取。可通过多种方式从脂肪提取间本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种培养基组合物，其特征在于，用于将包含腔昆布提取物的脂肪来源间充质干细胞重编程为诱导多能干细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.13 KR 10-2014-00724271.一种培养基组合物，其特征在于，用于将包含腔昆布提取物的脂肪来源间充质干细胞重编程为诱导多能干细胞。2.根据权利要求1所述的培养基组合物，其特征在于，上述腔昆布提取物包含在选自由达尔伯克改良伊格尔培养基、最小必需培养基、伊格尔基本培养基、RPMI1640、F-10、F-12、达尔伯克改良伊格尔培养基-F12、α-最小必需培养基、G-最小必需培养基、依斯考夫改良达尔伯克培养基、MacCoy’s5A培养基、AmnioMax、新型二代羊水培养基及Chang’s培养基、MesemCult-XF培养基组成的组中的培养基。3.根据权利要求1所述的培养基组合物，其特征在于，以培养基组合物为基准，包含10至400μg/ml的上述腔昆布提...

【专利技术属性】
技术研发人员：李尚燃，郑元珠，金浩彬，吴珉善，李桂浩，
申请(专利权)人：BBHC株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国;KR