用于提高干细胞再生能力的培养基组合物及使用它的干细胞培养方法技术

本发明专利技术涉及一种用于提高干细胞的自我更新能力的培养基组合物，其中包含apelin，以及使用该培养基组合物培养干细胞的方法。根据本发明专利技术，可以有效地培养干细胞以增殖而不改变细胞的特性，并且可以增加干细胞的端粒酶活性。因此，可以显著提高基于干细胞的细胞治疗功效。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于提高干细胞自我更新能力的培养基组合物，以及使用它培养干细胞的方法，更具体地，涉及用于培养干细胞的培养基组合物，所述培养基组合物可以提高干细胞的自我更新能力，而不改变干细胞的大小和活性，使老年人的干细胞的自我更新能力提高至与青少年的干细胞相当的水平，以及涉及使用该培养基组合物培养干细胞的方法。
技术介绍
干细胞是指不仅具有自我复制能力还具有分化成至少两种类型的细胞的能力的细胞，干细胞可分为全能干细胞、多能干细胞(pluripotentstemcells)和专能干细胞(multipotentstemcell)。全能干细胞是具有能够发育成一个完整个体的全能性质的细胞，而这些性质为卵母细胞和精子受精之后直到八细胞期的细胞所拥有。当这些细胞分离并植入子宫时，它们可以发育成一个完整的个体。多能干细胞是能够发育成外胚层、中胚层和内胚层来源的各种细胞和组织的细胞，来源于位于受精4-5天后生成的胚囊内部的内细胞群。这些细胞被称为“胚胎干细胞”，可以分化成各种其他组织细胞，但不能形成新的活生物体。专能干细胞是能够分化成仅特异于包含这些细胞的组织和器官的干细胞，专能干细胞不仅参与胎儿期、新生儿期和成体期的各种组织和器官的生长和发育，还参与成体组织的稳态维持和组织损伤后诱发再生的功能。组织特异性专能细胞统称为“成体干细胞”。通过收获来自人体各种器官的细胞以使所述细胞发育成干细胞而获得的成体干细胞具有仅分化成特异性组织的特征。然而，近年来，用于使成体干细胞分化成包括肝细胞等各种组织的试验取得显著成功，这成为了热点。特定而言，在再生医学领域进行了努力以使用细胞再生组织和器官并恢复它们由于疾病或事故等丧失的功能。在再生医学领域频繁使用的方法包括步骤：从患者采集干细胞、血液来源的单核细胞或骨髓来源的单核细胞，通过试管培养诱导细胞增殖和/或分化，并通过移植将所选择的未分化(干细胞和/或组细胞)和/或分化细胞引入患者体内。因此，预期现有通过药物或外科手术来治疗疾病的经典方法将被如上所述的用健康细胞、组织或器官来替代受损细胞、组织或器官的细胞/组织替代疗法所取代，并且因此干细胞的用途将进一步增加。因此，目前正在研究干细胞的各种功能。特别是，由于使用间充质干细胞的细胞治疗技术开始受到关注，已经开发出用于改善从人体中分离的间充质干细胞以适合于治疗目的的技术(WO2006/019357、韩国专利0795708和韩国专利0818214)。同时，人体器官的功能或细胞自我更新的能力随着年龄的增长而降低。类似于这样的现象，当干细胞在体外反复培养或被外部因素刺激时，干细胞的功能和形态会改变。换言之，细胞从体外培养开始的那一刻，细胞就开始失去其功能并进入衰老状态，即使该功能的损失几乎是不可察觉的。因为细胞这样的特性，优选使用早期细胞用于基因治疗，并且还优选使用即使已将干细胞培养长时间后仍不显著改变它们的特性，如增殖能力、分化能力、表型、形态和活性的干细胞，因此，对这样的细胞正在进行研究(BMCCellBiology2006,7:14,AgeingResearchReviews5,2006,91116)。因此，为发现可以提高干细胞的自我更新能力而即使当将干细胞反复培养时也不改变干细胞特性(如形态或活性)的培养基成分，本专利技术人进行了广泛的努力。结果本专利技术人发现，当在含有apelin的培养基组合物中培养干细胞时，干细胞的自我更新能力得以提高，从而完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种用于提高干细胞自我更新能力的培养基组合物，它可以将老年人的干细胞的自我更新能力提高至与青少年的干细胞相当的水平，以及提供一种使用该培养基组合物培养干细胞的方法。为了达到上述目的，本专利技术提供一种培养干细胞的培养基组合物，其含有apelin。本专利技术还提供了一种用于提高干细胞自我更新能力的方法，该方法包括在含有apelin的培养基组合物中培养干细胞的步骤。本专利技术的其他特征和实施方式将通过以下详细描述和所附权利要求更加清楚。附图说明图1示出通过用实施例1中所述的培养基培养从40多岁、50多岁和60多岁的人中分离的脂肪干细胞，传代3次，并在细胞培养后达4天用显微镜观察在每种培养基中的细胞形态所获得的显微照片。图2是示出通过用实施例1中所述的培养基培养从40多岁、50多岁和60多岁的人中分离的脂肪干细胞，传代3次，并测量在细胞培养后达4天在每种培养基中的细胞存活力所获得的脂肪干细胞的存活力的图表。图3是示出通过用实施例1中所述的培养基培养从40多岁、50多岁和60多岁的人中分离的脂肪干细胞，传代3次，并测量在细胞培养后达4天在每种培养基中的细胞大小所获得的脂肪干细胞的大小的图表。图4是示出通过用实施例1中所述的培养基培养从40多岁、50多岁和60多岁的人中分离的脂肪干细胞，传代3次，并测量在细胞培养后达4天在每种培养基中的细胞CPDL(细胞群体倍增水平)所获得的脂肪干细胞的CPDL图表。具体实施方式除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域的技术人员通常理解相同的含义。总体上，在本文中所使用的命名法是
公知且通常使用的。如本文所用，术语“干细胞”是指不仅具有自我复制能力，而且也具有分化成至少两种类型的细胞的能力的细胞。“成体干细胞”是指无论是在发育过程后形成胚胎的每个器官的阶段或是在成体阶段都存在的干细胞。如本文所用，术语“间充质干细胞”是指从人或哺乳动物组织中分离的并且可以源自各种组织的未分化的干细胞。具体地，间充质干细胞可以是脐带源性的间充质干细胞、脐带血源性的间充质干细胞、骨髓源性间充质干细胞、脂肪源性间充质干细胞、肌肉源性间充质干细胞、神经源性间充质干细胞、皮肤源性间充质干细胞、羊膜源性间充质干细胞或胎盘源性间充质干细胞。从每种组织中分离干细胞的技术是本领域已知的。如本文所使用，“脂肪组织源性间充质干细胞”是从脂肪组织中分离的未分化的成体干细胞，并且在本文中也称为“脂肪源性成体干细胞”、“脂肪干细胞”或“脂肪源性干细胞”。这些细胞可以根据本领域中已知的任何常规方法获得。分离脂肪组织源性间充质干细胞的方法可以是，例如，如下所述。即，可以通过培养由抽脂法得到的含有脂肪的悬浮液(在生理盐水中)，然后或者收集经胰蛋白酶处理而贴附于培养容器如烧瓶的干细胞层，或者用刮刀摩擦而直接收集悬浮在少量生理盐水中的那些本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于提高干细胞自我更新能力的培养基组合物，其含有1‑100nM浓度的apelin。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.05.09 KR 10-2013-00525581.一种用于提高干细胞自我更新能力的培养基组合物，其含有1-100nM
浓度的apelin。
2.如权利要求1所述的培养基组合物，还含有选自硒、抗坏血酸、维生
素E、儿茶素、番茄红素、β-胡萝卜素、辅酶Q-10(CoQ-10)、白藜芦醇、T-
BHQ、奥替普拉、赤杨提取物、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸
(DHA)组成的组中的一种或多种。
3.如权利要求2所述的培养基组合物，还含有辅酶Q-10(CoQ-10)或奥
替普拉。
4.如权利要求1所述的培养基组合物，其中所述培养基组合物含有选自<...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗廷燦，姜成根，赵廷胤，
申请(专利权)人：R生物有限公司，罗廷燦，
类型：发明
国别省市：韩国;KR