应用基因芯片分析牙周膜干细胞向成骨细胞分化的方法技术

技术编号:11258540 阅读:148 留言:0更新日期:2015-04-02 07:05
本发明专利技术提供一种应用基因芯片分析牙周膜干细胞向成骨细胞分化的方法,制备牙周膜干细胞得单细胞悬液,从单细胞悬液中分选对数生长期的牙周膜细胞,并采用STRO-1-PE标记,经FACS流式细胞仪分选收集STRO-1阳性细胞即为所需的牙周膜干细胞,接着克隆培养收集到的牙周膜干细胞,待其生长至80%的汇集度时,其中的胰酶也被消化后,即得种子液,将种子液接种在6孔板或者是24孔板中,24小时后改用诱导液培养。本发明专利技术通过利用基因芯片分析牙周炎治疗情况,对于检测PDLSC向成骨细胞分化过程中miRNA表达谱的变化,具有深远的意义。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种应用基因芯片分析牙周膜干细胞向成骨细胞分化的方法,其特征在于:包括如下具体操作步骤:(1)培养牙周膜干细胞:在无菌条件下取出因正畸及阻生而拔除的磨牙中的牙周膜,接着将牙周膜剪碎,并采用I型胶原酶及dispase酶于37℃下消化1h,之后离心后重悬,用100μm钢网过滤重悬液,获得单细胞悬液;(2)牙周膜干细胞的分选:对步骤(1)中获得的单细胞悬液,利用胰酶消化收集其中对数生长期的牙周膜细胞,并依据抗体说明书采用STRO‑1‑PE标记细胞,经FACS流式细胞仪分选收集STRO‑1阳性细胞,所收集到的STRO‑1阳性细胞即为所需的牙周膜干细胞;(3)成骨细胞定向诱导分化:克隆培养步骤(2)所得的牙周膜干细胞,待其生长至80%的汇集度时,其中的胰酶也被消化后,即得种子液;之后将种子液接种在6孔板或者是24孔板中,24小时后改用诱导液培养,且诱导液中的矿化液包括:10%的胎牛血清、10‑6mol/L地塞米松、50mg/Lα‑抗坏血酸以及10mmol/Lβ‑甘油磷酸钠的α‑MEM;(4)成骨细胞的鉴定:取步骤(3)矿化诱导后的细胞,采用RT‑PCR和免疫组化方法测其骨钙素OC和I型胶原的转录和蛋白水平的表达,并进行ALP活性测定、及Von Kossa和Alizarin red染色成骨特性检测。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:吕红兵郑碧琼雷丽珊张明
申请(专利权)人:福建医科大学附属口腔医院
类型:发明
国别省市:福建;35

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