用于抑制消化道肿瘤干细胞增殖、分化和干性诱导的药物，属于药物技术领域。本发明专利技术一方面提供了一种抑制消化道肿瘤干细胞增殖、分化和干性诱导的药物，该药物能够抑制消化道肿瘤干细胞的增值、转移和分化，并且该药物能够减少常规化疗药物所引起的肿瘤细胞干性化；本发明专利技术另一方面提供了小檗碱的一种新用途。
Medicine for inhibiting proliferation, differentiation and dry induction of digestive tract cancer stem cells
The invention relates to a medicine for inhibiting the proliferation, differentiation and dry induction of the digestive tract cancer stem cells, which belongs to the technical field of medicine. One aspect of the invention provides an inhibition of gastrointestinal cancer stem cell proliferation, differentiation and drug induced dry, the drug can inhibit the digestive tract tumor stem cell proliferation, differentiation and metastasis, and can reduce the drug caused by conventional chemotherapy drugs in tumor cell dry; another aspect of the invention provides a the new usage of berberine.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物
，具体涉及用于抑制消化道肿瘤干细胞增殖、分化和干性诱导的药物。
技术介绍
随着对肿瘤异质性研究的深入，传统的克隆演进学说受到新兴肿瘤干细胞（cancerstemcells，CSCs）学说的挑战。CSCs学说认为肿瘤组织是由处于不同分化层级的肿瘤细胞组成的，其中CSCs位于肿瘤细胞群体的顶端，能仅以10-100个细胞即可在宿主体内形成一个与人体肿瘤性质相同的肿瘤，是造成肿瘤的异质性的根本所在。2006年，美国癌症研究协会定义CSCs为存在于肿瘤中的一小群具有自我更新、多向分化潜能及高致瘤性的肿瘤细胞，也称肿瘤起始细胞（tumorinitiatingcells，TICs）。至今为止，已在白血病、胶质瘤、乳腺癌、结直肠癌和肺癌等多种肿瘤中分离鉴定出CSCs。愈来愈多的实验证据表明，CSCs除具有自我更新、多向分化和高致瘤特性外，也是肿瘤血管生成、耐药、侵袭、转移及复发的根本所在。临床常规的化疗药物，如顺铂、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、卡培他滨等，虽然能杀死肿瘤组织中大多数亚型的肿瘤细胞，但对CSCs的抑制或杀死作用则非常有限，甚至会诱导部分肿瘤亚型细胞干性增强，从而导致肿瘤耐药、复发及转移。因此，靶向CSCs的诊断和治疗，有望成为完全防治肿瘤的新途径，已成为肿瘤研究领域的前沿和热点。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供一种用于抑制消化道肿瘤干细胞增殖、分化和干性诱导的药物的技术方案。所述的用于抑制消化道肿瘤干细胞增殖、分化和干性诱导的药物，其特征在于含有有效成分小檗碱。所述的药物，其特征在于所述的消化道肿瘤干细胞包括胃癌干细胞、结肠癌干细胞和肝癌干细胞。所述的药物，其特征在于该药物为原型药或其药学上可接受的盐。所述的小檗碱在制备抑制消化道肿瘤干细胞增殖、分化和干性诱导的药物中的应用。所述的应用，其特征在于所述的消化道肿瘤干细胞包括胃癌干细胞、结肠癌干细胞和肝癌干细胞。所述的小檗碱在增加常规化疗药对消化道肿瘤干细胞的疗效和减少常规化疗药对消化道肿瘤干细胞的耐药性中的应用。所述的小檗碱在减少常规化疗药引起的消化道肿瘤干细胞干性增强中的应用。所述的一种增加常规化疗药对消化道肿瘤干细胞的疗效和减少常规化疗药对消化道肿瘤干细胞的耐药性的药物，其特征在于含有小檗碱和化学化疗药。所述的一种减少常规化疗药引起的消化道肿瘤干细胞干性增强的药物，其特征在于含有小檗碱和化学化疗药。本专利技术一方面提供了一种抑制消化道肿瘤干细胞增殖、分化和干性诱导的药物，该药物能够抑制消化道肿瘤干细胞的增值、转移和分化，并且该药物能够减少常规化疗药物所引起的肿瘤细胞干性化；本专利技术另一方面提供了小檗碱的一种新用途。附图说明图1为荧光定量PCR检测各肿瘤细胞及其干细胞中干性基因的表达；图2为小檗碱和顺铂对原代肿瘤细胞及其肿瘤干细胞的抑制作用；图3为小檗碱对肿瘤干细胞的诱导凋亡作用；图4为小檗碱对裸鼠皮下肿瘤组织生长的抑制作用；图5为小檗碱对荷瘤裸鼠体重变化的影响；图6为小檗碱对裸鼠皮下肿瘤组织中相关基因表达的影响；图7为小檗碱对肿瘤干细胞化疗敏感性的作用。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。实施例1肿瘤干细胞的分离鉴定人胃腺癌细胞系SGC7901、MKN28；人结肠癌HT29、SW620；人肝癌细胞系Huh7、SMMC-7721，使用本实验室细胞冻存库。本研究采用国际常用的无血清饥饿培养法，从现有细胞系中分离、富集肿瘤干细胞。具体操作如下：分别取对数生长期的上述各类型的癌细胞，经胰酶消化，分别制成单细胞悬液，使用PBS洗涤离心去除残留的血清后，作细胞计数，取2万个细胞接种于10cm超低粘附培养皿中，添加含B27（1×）及EGF5ng/ml的DMEM/F12培养基10ml，培养3-5天，即可见有细胞球生长，为第一代肿瘤干细胞球；每隔5天对细胞球进行传代，用移液器吹打细胞球以求吹散细胞球，注意操作轻柔，尽量吹打成单个细胞；离心收集细胞球，按1:3比例传代接种于DMEM/F12干细胞培养基，继续培养扩增，到10-14天时，吹打细胞球成单细胞，离心后接种于含10%FBS的完全培养基中，贴壁1h，去除没有贴壁的凋亡细胞，使用贴壁细胞进行后续实验。分别取各类型肿瘤干细胞适量，提取总RNA，进行cDNA合成，PCR反应条件如下：a．定量引物：b．定量反应程序反应体系：cDNA1μl、上游引物0.5μl、下游引物0.5μl、2xSYBRmix10μl、水8μl，总量为20μl。反应程序：预变性95℃1min，变性95℃10sec，退火55℃10sec，延伸72℃30sec，40个循环。在循环结束后立即进行融解曲线测定，检测温度为65℃-95℃，升温速率为0.5℃/sec，恒温时间为1sec/次。经无血清饥饿培养法，大部分肿瘤细胞死亡，少数细胞团抱成球生长；收集细胞球（即为肿瘤干细胞CSC），按1:3比例传代接种于DMEM/F12干细胞培养基，继续培养扩增至所需实验数量。采用荧光定量PCR技术，比较CSC和原代细胞系细胞中的干性相关转录因子Klf4、Oct4、NANOG、Sox2以及干性相关基因Bmi-1的表达。结果如图1显示，各细胞系诱导的肿瘤干细胞中Klf4、Oct4、NANOG、Sox2、Bmi-1的表达均显著高于原代细胞系的表达，证明这些细胞球具有干细胞特性。根据干性基因表达鉴定结果，选取干性基因表达最高的第三代诱导细胞球(CSC-3)，轻轻吹打制备成单细胞悬液，用无血清培养液稀释细胞至200ul中含所需细胞数(见表1)，用无菌注射器将200μl细胞悬液接种于4～6周龄裸鼠腋下或者腹股沟(裸鼠均为雄性)，饲养于标准无菌条件的ICU单元，每隔3-5天观察动物生长及成瘤情况。实验结果如表1所示，在裸鼠体内1×104-5×104个肿瘤干细胞即可引起肿瘤的发生；而原代肿瘤细胞需在5×106个细胞数目的条件下接种，才能引起小鼠皮下肿瘤生长。证明本实验诱导的肿瘤干细胞比原代肿瘤细胞具有更强的致癌特性。表1裸鼠皮下移植不同肿瘤细胞数的成瘤情况注：-表示未检测；m/n，m表示成瘤的裸鼠数量，n表示用于实验的裸鼠数量。实施例2小檗碱对原代肿瘤细胞及其肿瘤干细胞的体外抑制作用选用对数生长期的贴壁肿瘤干细胞，用胰酶消化后，用含10％小牛血清的RPMIl640培养基配成50000个/ml的细胞悬液，接种于96孔培养板中，每孔接种100μl，37℃，5％CO2培养24h。实验组加入含不同浓度药物的无血清培养基，对照组则换含等体积溶剂的培养基，每组设3-6个平行孔，37℃，5％CO2培养48h。每孔加入20μl新鲜配制的含0.2mg/mlMTT的无血清培养基，37℃继续培养4h。小心吸去上清，并加入150μlDMSO，用微型超声振荡器混匀后，在酶标仪上以试验波长为570nm，参比波长为450nm测定光密度值。图2结果所示，在同等给药剂量（50μM）下,小檗碱无论是对原代肿瘤细胞，还是对肿瘤干细胞体外增殖的抑制作用均明显高于顺本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于抑制消化道肿瘤干细胞增殖、分化和干性诱导的药物，其特征在于含有有效成分小檗碱。
【技术特征摘要】
1.用于抑制消化道肿瘤干细胞增殖、分化和干性诱导的药物，其特征在于含有有效成分小檗碱。2.如权利要求1所述的药物，其特征在于所述的消化道肿瘤干细胞包括胃癌干细胞、结肠癌干细胞和肝癌干细胞。3.如权利要求1所述的药物，其特征在于该药物为原型药或其药学上可接受的盐。4.小檗碱在制备抑制消化道肿瘤干细胞增殖、分化和干性诱导的药物中的应用。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述的消化道肿瘤干细胞包括胃癌干细胞、结肠...
【专利技术属性】
技术研发人员：马月，吕良忠，俞佳，余陈欢，应华忠，方杰，张欢欢，
申请(专利权)人：浙江省医学科学院，吕良忠，俞佳，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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