一种人工诱导多能性干细胞快切割方法技术

本发明专利技术涉及到一种细胞分割方法，尤其涉及到一种人工诱导多能性干细胞快切割方法。该方法使用1毫米长枪头将人工诱导多能性干细胞吸入接着吹出，反复吹吸后，在显微镜下观察，取大小合适的人工诱导多能性干细胞块，转移到预先准备好的含有基底细胞的培养皿中，完成人工诱导多能性干细胞的分割，可以进行传代。人工诱导多能性干细胞快切割方法，需要的细胞培养基较少，能大大降低细胞传代过程中的成本；通过1毫米长枪头的吸吹气对人工诱导多能性干细胞，大大降低了，人工诱导多能性干细胞分割过程的难度，提高了人工诱导多能性干细胞分割效率和传代成功率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及到一种细胞分割方法，尤其涉及到一种人工诱导多能性干细胞快切割方法。
技术介绍
诱导多能干细胞(inducedpluripotentstemcellsiPS)是2006年日本京都大学ShinyaYamanaka在世界著名学术杂志《细胞》上率先报道了诱导多能干细胞的研究。他们把Oct3/4，Sox2、c-Myc和K1f4这四种转录因子基因克隆入病毒载体，然后引入小鼠成纤维细胞，发现可诱导其发生转化，产生的iPS细胞在形态、基因和蛋白表达、表观遗传修饰状态、细胞倍增能力、类胚体和畸形瘤生成能力、分化能力等方面都与胚胎干细胞相似。iPS干细胞的出现，在干细胞研究领域、表观遗传学研究领域以及生物医学研究领域都引起了强烈的反响，这不仅是因为它在基础研究方面的重要性，更是因为它为人们带来的光明的应用前景。在基础研究方面，它的出现，已经让人们对多能性的调控机制有了突破性的新认识。细胞重编程是一个复杂的过程，除了受细胞内因子调控外，还受到细胞外信号通路的调控。对于Oct4、Sox2和Nanog等维持于细胞自我新能力的转录因子的研究正在逐渐地展开；利用iPS干细胞作为实验模型，只操纵几个因子的表达，这更会大大加速对多能性调控机理的深入研究。在实际应用方面，iPS干细胞的获得方法相对简单和稳定，不需要使用卵细胞或者胚胎。这在技术上和伦理上都比其他方法更有优势，iPS干细胞的建立进一步拉近了干细胞和临床疾病治疗的距离，iPS干细胞在细胞替代性治疗以及发病机理的研究、新药筛选方面具有巨大的潜在价值。此外，iPS干细胞在神经系统疾病、心血管疾病等方面的作用也日益呈现，iPS干细胞在体外已成功地被分化为神经元细胞、神经胶质细胞、心血管细胞和原始生殖细胞等。在临床疾病治疗中具有巨大应用介值。与经典的胚胎干细胞技术和体细胞核移植技术不同，iPS技术不使用胚胎细胞或卵细胞，因此没有伦理学的问题。利用iPS技术可以用病人自己的体细胞制备专有的干细胞，所以不会有免疫排斥的问题。本专利技术涉及的一种人工诱导多能性干细胞快切割方法，该方法使用1毫米长枪头将人工诱导多能性干细胞吸入接着吹出，反复吹吸后，在显微镜下观察，取大小合适的人工诱导多能性干细胞块，转移到预先准备好的含有基底细胞的培养皿中，完成人工诱导多能性干细胞的分割，可以进行传代。人工诱导多能性干细胞快切割方法，需要的细胞培养基较少，能大大降低细胞传代过程中的成本；通过1毫米长枪头的吸吹气对人工诱导多能性干细胞，大大降低了，人工诱导多能性干细胞分割过程的难度，提高了人工诱导多能性干细胞分割效率和传代成功率。
技术实现思路
为了克服
技术介绍
中存在的缺陷，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种人工诱导多能性干细胞快切割方法，其步骤为：(1)将人工诱导多能性干细胞放置在直经为3.5厘米、6厘米或10厘米的细胞培养皿内培养，使得人工诱导多能性干细胞覆盖掉细胞培养皿底面积60％以上；(2)将步骤(1)所述细胞培养皿中的培养基吸出，使用1-3毫升磷酸盐缓冲液(PBS)对细胞培养皿进行清洗，然后将磷酸盐缓冲液吸出；(3)向细胞培养皿中加入0.5-1毫升细胞分裂素(CTK)后摇均匀，常温下静止30-120秒，在此期间，至少拍打细胞培养皿一次；(4)在显微镜下观察，待基底细胞剥离后，加入2-5毫升PBS进行清洗，然后将PBS吸出，重复上述加入PBS操作1-2次，在显微镜下观察，确保细胞剥离液完全被洗净，然后将PBS彻底吸出；(5)向细胞培养皿中加入人工诱导多能性干细胞培养液1-1.5毫升，然后用细胞刷将人工诱导多能性干细胞刷离培养皿；(6)使用1毫米长枪头将步骤(5)中制备出的人工诱导多能性干细胞吸入接着吹出，反复吹吸3-10次，在显微镜下观察，将大小在30-100微米内的人工诱导多能性干细胞块，转移到预先准备好的含有基底细胞的培养皿中，人工诱导多能性干细胞就完成了分割，可以进行传代。本专利技术涉及的一种人工诱导多能性干细胞快切割方法，该方法使用1毫米长枪头将人工诱导多能性干细胞吸入接着吹出，反复吹吸后，在显微镜下观察，取大小合适的人工诱导多能性干细胞块，转移到预先准备好的含有基底细胞的培养皿中，完成人工诱导多能性干细胞的分割，可以进行传代。人工诱导多能性干细胞快切割方法，需要的细胞培养基较少，能大大降低细胞传代过程中的成本；通过1毫米长枪头的吸吹气对人工诱导多能性干细胞，大大降低了，人工诱导多能性干细胞分割过程的难度，提高了人工诱导多能性干细胞分割效率和传代成功率。具体实施方式现在结合具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。具体实施一：一种人工诱导多能性干细胞快切割方法，其特征在于其步骤为：(1)将人工诱导多能性干细胞放置在直经为3.5厘米的细胞培养皿内培养，使得人工诱导多能性干细胞覆盖掉细胞培养皿底面积的65％；(2)将步骤(1)所述细胞培养皿中的培养基吸出，使用1毫升磷酸盐缓冲液(PBS)对细胞培养皿进行清洗，然后将磷酸盐缓冲液吸出；(3)向细胞培养皿中加入0.5毫升细胞分裂素(CTK)后摇均匀，常温下静止30秒，在此期间，拍打细胞培养皿一次；(4)在显微镜下观察，待基底细胞剥离后，加入2毫升PBS进行清洗，然后将PBS吸出，重复上述加入PBS操作1次，在显微镜下观察，确保细胞剥离液完全被洗净，然后将PBS彻底吸出；(5)向细胞培养皿中加入人工诱导多能性干细胞培养液1毫升，然后用细胞刷将人工诱导多能性干细胞刷离培养皿；(6)使用1毫米长枪头将步骤(5)中制备出的人工诱导多能性干细胞吸入接着吹出，反复吹吸3次，在显微镜下观察，将大小在30-100微米内的人工诱导多能性干细胞块，转移到预先准备好的含有基底细胞的培养皿中，人工诱导多能性干细胞就完成了分割，可以进行传代。具体实施二：一种人工诱导多能性干细胞快切割方法，其步骤为：(1)将人工诱导多能性干细胞放置在直经为6厘米的细胞培养皿内培养，使得人工诱导多能性干细胞覆盖掉细胞培养皿底面积的80％；(2)将步骤(1)所述细胞培养皿中的培养基吸出，使用2毫升磷酸盐缓冲液(PBS)对细胞培养皿进行清洗，然后将磷酸盐缓冲液吸出；(3)向细胞培养皿中加入0.7毫升细胞分裂素(CTK)后摇均匀，常温下静止80秒，在此期间，拍打细胞培养皿二次；(4)在显微镜下观察，待基底细胞剥离后，加入4毫升PBS进行清洗，然后将PBS吸出，重复上述加入PBS操作2次，在显微镜下观察，确保细胞剥离液完全被洗净，然后将PBS彻底吸出；(5)向细胞培养皿中加入人工诱导多能性干细胞培养液1.3毫升，然后用细胞刷将人工诱导多能性干细胞刷离培养皿；(6)使用1毫米长枪头将步骤(5)中制备出的人工诱导多能性干细胞吸入接着吹出，反复吹吸6次，在显微镜下观察，将大小在30-100微米内的人工诱导多能性干细胞块，转移到预先准备好的含有基底细胞的培养皿中，人工诱导多能性干细胞就完成了分割，可以进行传代。具体实施三：一种人工诱导多能性干细胞快切割方法，其步骤为：(1)将人工诱导多能性干细胞放置在直经为10厘米的细胞培养皿内培养，使得人工诱导多能性干细胞覆盖掉细胞培养皿底面积的95％；(2)将步骤(1)所述细胞培养皿中的培养基吸出，使用3毫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人工诱导多能性干细胞快切割方法，其特征在于其步骤为：(1)将人工诱导多能性干细胞放置在直经为3.5厘米、6厘米或10厘米的细胞培养皿内培养，使得人工诱导多能性干细胞覆盖掉细胞培养皿底面积60％以上；(2)将步骤(1)所述细胞培养皿中的培养基吸出，使用1‑3毫升磷酸盐缓冲液(PBS)对细胞培养皿进行清洗，然后将磷酸盐缓冲液吸出；(3)向细胞培养皿中加入0.5‑1毫升细胞分裂素(CTK)后摇均匀，常温下静止30‑120秒，在此期间，至少拍打细胞培养皿一次；(4)在显微镜下观察，待基底细胞剥离后，加入2‑5毫升PBS进行清洗，然后将PBS吸出，重复上述加入PBS操作1‑2次，在显微镜下观察，确保细胞剥离液完全被洗净，然后将PBS彻底吸出；(5)向细胞培养皿中加入人工诱导多能性干细胞培养液1‑1.5毫升，然后用细胞刷将人工诱导多能性干细胞刷离培养皿；(6)使用1毫米长枪头将步骤(5)中制备出的人工诱导多能性干细胞吸入接着吹出，反复吹吸3‑10次，在显微镜下观察，将大小在30‑100微米内的人工诱导多能性干细胞块，转移到预先准备好的含有基底细胞的培养皿中，人工诱导多能性干细胞就完成了分割，可以进行传代。...

【技术特征摘要】
1.一种人工诱导多能性干细胞快切割方法，其特征在于其步骤为：(1)将人工诱导多能性干细胞放置在直经为3.5厘米、6厘米或10厘米的细胞培养皿内培养，使得人工诱导多能性干细胞覆盖掉细胞培养皿底面积60％以上；(2)将步骤(1)所述细胞培养皿中的培养基吸出，使用1-3毫升磷酸盐缓冲液(PBS)对细胞培养皿进行清洗，然后将磷酸盐缓冲液吸出；(3)向细胞培养皿中加入0.5-1毫升细胞分裂素(CTK)后摇均匀，常温下静止30-120秒，在此期间，至少拍打细胞培养皿一次；(4)在显微镜下观察，待基底细胞剥离后，加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：高飞，
申请(专利权)人：高飞，
类型：发明
国别省市：辽宁;21