全能干细胞的诱导方法、及用该方法制备的全能干细胞技术

本发明专利技术涉及一种用于诱导定制的全能干细胞的方法、通过该方法制备的全能干细胞及包含所述全能干细胞的组合物，其中，所述定制的全能干细胞是通过利用莽草酸、包含莽草酸的植物提取物或植物干细胞以及再分化的植物干细胞(愈伤组织)的提取物来重新编程分化的成体细胞而诱导。根据本发明专利技术，由于没有用卵子来制备具有与胚胎干细胞相同能力的全能干细胞，因而可以解决道德问题。最重要的是，通过使用已被证明对人无害的植物干细胞提取物，可以制备安全得到保障的全能干细胞。此外，本发明专利技术可用来研发专给受试者定制的免疫相容的细胞治疗剂。此外，通过诱导来自身患疾病的受试者体内的全能干细胞，本发明专利技术可非常有助于研究治疗方法的和诊断病因。此外，本发明专利技术涉及一种包含莽草酸或含有莽草酸的植物提取物的组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术设及一种诱导全能干细胞的方法、用该方法制备的全能干细胞和包含该全 能干细胞的组合物，其中，所述方法是通过对分化的成体细胞进行重新编程和/或去分化来 诱导全能干细胞的。 本专利技术还设及包含全能干细胞的药物组合物或化妆品组合物。 本专利技术还设及用于激活干细胞、增殖皮肤细胞、再生皮肤或抗老化的组合物。
技术介绍
干细胞为未分化细胞，其可W分化成各种类型的组成生物组织的细胞，且可W从 胚胎、胎儿和成体组织中获得。在所述干细胞的不同细胞类型中，所述全能干细胞 (pluripotent stem cell)是指那些可W分化成S种胚层，即内胚层、中胚层和外胚层中的 任一种的干细胞。 所述干细胞可根据W下内容进行分类:解剖部位、细胞功能、表现在细胞表面上的 抗原、转录因子、由细胞产生的蛋白质和源自所述干细胞的特定细胞类型。 作为比较明确的分类标准，所述干细胞可基于其起源进行分类。胚胎干细胞化S细 胞)是从胚胎中分离出来的，且成体干细胞是从成体组织中分离出来的。 或者，所述干细胞可W根据它们分化成专用细胞的种类的能力而分成全能干细胞 (pluripoten巧）、多能干细胞(multipoten巧）和单能干细胞(unipotent)。通常，胚胎干细 胞化S细胞)可被分作全能干细胞，且成体干细胞被分作全能干细胞和单能干细胞。[000引源自早期胚胎，即囊胚的内细胞团中的胚胎干细胞化S细胞)为全能干细胞，全能 干细胞可W分化成能够组成成熟身体的所有组织。也就是说，所述胚胎干细胞为未分化的 细胞，运种未分化的细胞可不受限地进行增殖且可W分化成所有的细胞类型。不像所述成 体干细胞，所述胚胎干细胞由于可W形成生殖细胞，因此它们可W遗传给下一代。 然而，所述全能干细胞由于在其制备过程中要破坏胚胎而引起了严重的宗教及伦 理问题。此外，由于它们源自受限的胚胎，且个体之间缺乏免疫相容性，因而无法避免免疫 排斥。为了克服运些问题，人们尝试各种方法来人工制备全能干细胞，如通过使用源自成体 的细胞的诱导的胚胎干细胞或如同胚胎干细胞具有全能性的细胞。 代表性例子包括体细胞核移植(SCNT)、与胚胎干细胞的融合和通逊良定因子的重 新编程(r巧rogramming by defined factors)。所述体细胞核移植的效率极低且由于需要 大量的卵子而存在伦理上的问题。所述与胚胎干细胞的融合由于诱导的细胞另外具有两对 基因而存在细胞稳定性方面的严重问题。所述通过限定因子的重新编程由于使用了含有致 癌基因的病毒而牵设到致癌的严重问题。 因此，为了研发细胞治疗剂，人们需要一种用于制备诱导的全能干细胞的方法，该 方法能够确保稳定性和安全性且不会引起道德问题。 为了满足上述需求，研究人员对通过体细胞导入四种基因而去分化来诱导全能干 细胞的方法做过研究（Takahashi K,Yamanaka S(2006)，Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.Cell 126:663-676) D该方法由于使用了成体细胞而不会违背道德，且因为使用了 自体细胞而解决了免疫排斥的问题。 本专利技术的专利技术人是从源自动物的诱导的全能干细胞（iPSC)的提取物中获得去分 化的干细胞的，当其中存在几个限制。 第一、该方法需要大量(20mg或W上）的iPSC提取物。因此，使用成本高且需要很多 劳动力的人源去分化干细胞的提取物来诱导去分化并没有得到成功。例如，为了制备人源 去分化干细胞W获得20mg提取物，一名专家需要卖力工作至少3个月，运成本非常高。 第二、当动物干细胞或去分化的干细胞的提取物处理待诱导的体细胞时，如果所 述细胞在所述提取物中未被完全地破坏而存活下来时，从所述存活下来的去分化干细胞中 不容易将去分化诱导的细胞区分开来，因而需要基因组DNA的分析，运成本很高且耗费时 间。 第=、由于使用蛋白的人源去分化干细胞的制备几乎无法成功，因此必需要使用 利用病毒制得的人源去分化干细胞的提取物。由于所得细胞可包含源自所述病毒的致癌物 质，因此难W将所得细胞应用在临床上。
技术实现思路
技术问题 在一方面，为了解决相关领域中存在的问题，本专利技术在于提供一种全能干细胞的 制备方法，所述全能干细胞的稳定性和安全性得到了保障且不会引起道德问题。本专利技术还 在于提供一种用于诱导人源去分化干细胞的方法，该方法几乎没有得到实现。 本专利技术的专利技术人已研发出一种通过使用源自成体(adult)的细胞来诱导全能干细 胞的方法，从而所述全能干细胞与成体具有相同的遗传背景。根据本专利技术，具有各种遗传背 景的源自成体的细胞中可W获得相同的结果。因此，本专利技术的方法适于全能干细胞的制备。 技术方案 在一方面，本专利技术提供一种用于诱导干细胞的方法，该方法包括：用莽草酸、含莽 草酸的植物提取物、含莽草酸的植物干细胞提取物、或含有它们的组合物处理源自成体的 细胞。 具体地，在一方面，本专利技术提供一种用于制备诱导的全能干细胞的方法，该方法包 括:从植物干细胞或通过各种方法诱导的任何种类的诱导的全能植物干细胞中提取包含活 性成分的提取物；向源自成体的细胞中注入所述提取物;及通过培养注入有所述提取物的 所述细胞，来制备全能细胞，如胚胎干细胞。 在另一方面，本专利技术提供一种用于制备干细胞的方法，该方法进一步包括：向源自 成体的细胞中注入莽草酸、含莽草酸的植物提取物、含莽草酸的植物干细胞提取物、或含有 它们的组合物;及培养注入有所述莽草酸、所述提取物或所述组合物的所述细胞。 所述提取物可W为愈伤组织提取物。 在本专利技术的一示例性实施例中，所述方法可进一步包括:在注入所述提取物前，用 细胞膜渗透剂处理所述源自成体的细胞。所述细胞膜渗透剂可W包含链球菌溶血素0和洋 地黄，而且只要所述细胞膜渗透剂能易于将本专利技术的莽草酸或提取物注入进细胞膜内就不 限于此。在本专利技术的另一示例性实施例中，所述方法进一步包括:待转移至饲养细胞层后， 培养那些注入有所述提取物的源自成体的细胞。所述饲养细胞层可W包含STO细胞，但不限 于此。 在另一方面，本专利技术提供一种用于制备诱导的全能干细胞的方法，该方法包括:从 植物干细胞、愈伤组织或通过各种方法诱导的任何种类的诱导的全能植物干细胞中提取含 有活性成分的提取物；向源自成体的细胞中注入所述提取物;通过使用常规的细胞培养基， 培养注入有所述提取物的细胞;及待转移至饲养细胞层后，通过使用胚胎干细胞培养基进 一步培养所述细胞。 在另一方面，本专利技术提供通过上述方法制得的组合物。 在另一方面，本专利技术提供包含所述干细胞的组合物。在另一方面，本专利技术提供一种 用于诱导可诱导的全能干细胞（iPSC)的方法、使用该方法制备的全能干细胞及包含该全能 干细胞的细胞治疗剂，其中，该方法是通过利用莽草酸、或包含莽草酸的植物提取物或植物 干细胞提取物来诱导去分化成体细胞的重新编程和/或去分化。 在本专利技术中使用的包含莽草酸的植物提取物或植物干细胞提取物可W进一步包 含选自红杉（巨杉）、黄富蒲、菊芋、蓝杉（Picea pungens)、白云杉(Picea gla本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备干细胞的方法，包括：用莽草酸、包含莽草酸的植物提取物、包含莽草酸的植物干细胞提取物或包含它们中的一种或多种的组合物来处理源自成体的细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：金雅凛，金秀娜，朴元锡，权裕旭，朴永培，金孝洙，白宰承，
申请(专利权)人：株式会社爱茉莉太平洋，首尔大学校产学协力团，
类型：发明
国别省市：韩国;KR