一种细胞冻存液及冻存方法技术

本发明专利技术涉及细胞冻存技术领域，具体涉及一种细胞冻存液及冻存方法，细胞冻存液包括甲基纤维素、麦芽糖、DMSO、人血白蛋白、右旋糖酐、L‑丝氨酸、i‑肌醇和氯化钠注射液，本发明专利技术的细胞冻存液中，DMSO可以防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的损伤；甲基纤维素作为稳定剂和增黏剂，降低冻存过程形中游离水形成冰晶对细胞的伤害；麦芽糖具有良好的抗结晶性，防止冰晶对细胞的损伤。通过上述原料的组合，可以最大程度上防止冰晶对细胞的损耗，并且尽可能地降低了DMSO的含量，因而对PBMC或干细胞或T淋巴细胞等细胞具有较好的保护能力，存活率高。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞冻存液及冻存方法
本专利技术涉及细胞冻存
，具体涉及一种细胞冻存液及冻存方法。
技术介绍
目前，在细胞冷冻保存领域中，为保护细胞免受冷冻损伤，人们广泛采用的是在冻存液中添加冷冻保护剂(CPA)。而二甲基亚砜(DMSO)是细胞冷冻保存中最常用的冷冻保护剂，但过高浓度的DMSO对细胞存在一定的毒性，会引起细胞内蛋白变性，因而不适的DMSO浓度选择会对细胞的保存有着很大影响。现有冻存液冻存的细胞复苏后活细胞得率较少，冻存液对细胞损伤很大，会直接导致细胞死亡。冻存过程中降温方法对细胞存活影响很大，现有技术没有严格控制，致使降温过程细胞死亡率提升。
技术实现思路
为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本专利技术的目的在于提供一种细胞存活率高的细胞冻存液及冻存方法。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种细胞冻存液，包括如下原料：余量为氯化钠注射液。本专利技术的细胞冻存液中，DMSO在深低温(零下200度)保存细胞时冻存过程中可以防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞冻存液，其特征在于：包括如下原料：/n

【技术特征摘要】
1.一种细胞冻存液，其特征在于：包括如下原料：





2.根据权利要求1所述的一种细胞冻存液，其特征在于：所述氯化钠注射液的质量浓度为0.9％。


3.一种细胞冻存方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)取指数生长期的细胞进行离心，弃上清，所述指数生长期的细胞为PBMC或干细胞或T淋巴细胞；
(2)用预冻存培养基重悬，然后进行离心；
(3)重复步骤(2)1-2次，然后用预冻存培养基重悬，调整细胞密度；
(4)在37℃，5％CO2，饱和湿度条件下孵育30-60min；
(5)进行离心，弃上清；
(6)用权利要求1或2所述的细胞冻存液进行重悬，然后进行离心，弃上清；
(7)用权利要求1或2所述的细胞冻存液进行重悬，调整细胞密度，转移至冻存管；
(8)将冻存管放入程序降温仪中进行梯度降温；
(9)降温完成后，将冻存管转入液氮中进行保存。


4.根据权利要求3所述的一种细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤(1)中的离心条件为23-25℃，15-20min，400-600g。


5.根据权利要求3所述的一种细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤(2)中的离心条件为23-25℃，20-30min，300-400g。


6.根据权利要求3所述的一种细胞冻存方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭一洪，李相鲁，李莉，何安涛，
申请(专利权)人：广东万海细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44