【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及工程细 胞系MDCK-hST3GalIV-0 4GalTl及其构建方法，所构建细胞系可用于禽流感疫苗株的大規模细胞化生产。
技术介绍
流感病毒表面的血凝素(HA)通过与宿主细胞表面的唾液酸寡糖受体结合从而起始病毒感染宿主细胞，禽源和马源流感病毒偏嗜结合α 2，3-唾液酸寡糖受体(Neu5Aca2，3Gal)，而人源和猪源流感病毒偏嗜结合α2，6_唾液酸寡糖受体(Neu5Ac α 2，6Gal)。因此，细胞表面唾液酸受体的类型及丰度，影响流感病毒对不同宿主的适应性。不同的唾液酸受体对流感病毒在宿主细胞中感染、复制和扩散产生重要的影响。目前获得批准生产的是鸡胚来源的灭活疫苗。哺乳动物细胞生产的疫苗在动物模型中表现出较好的保护性作用，当前Madin-Darby犬肾上皮细胞系(MDCK)被认为是培养A型和B型流感病毒最适合的细胞系。传统的流感病毒疫苗是依靠鸡胚生产的，病毒经过培养增殖、浓缩、灭活、进一歩纯化，配制、无菌灌装，最后检测和放行。除了研发使用高产重组毒株作为A型流感的种毒，基本生产エ艺在过去的60年几乎没什么变化。不仅成本代价高，而且鸡胚的残留物...
【技术保护点】
一种稳定表达hST3GalIV和β1？4GalT1的MDCK细胞系，是MDCK？hST3GalIV？β4GalT1，其含有hST3GalIV和β1？4GalT1基因序列；所述hST3GalIV的基因序列如SEQ？ID？No:？1所示，所述β1？4GalT1的基因序列如SEQ？ID？No:？3所示；所述细胞系的保藏号是CGMCC？No.？5967。
【技术特征摘要】
2012.07.12 CN 201210240483.31.一种稳定表达hST3GalIV和β l_4GalTl的MDCK细胞系，是MDCK-hST3GalIV-P 4GalTl，其含有 hST3GalIV 和 β l_4GalTl 基因序列；所述hST3GalIV 的基因序列如SEQ ID No: I所示,所述β l-4GalTl的基因序列如SEQ ID No: 3所示；所述细胞系的保藏号是CGMCC No. 5967。2.权利要求I所述的稳定表达hST3GalIV和βl_4GalTl的MDCK细胞系的构建方法，其特征在于，是将带有编码hST3GalIV基因序列的真核表达质粒和带有编码β l_4GalTl基因序列的真核表达质粒转染至MDCK细胞，最终获得能稳定表达hST3GalIV和β l_4GalTl基因的细胞系 MDCK-hST3GalIV- β 4GalTl。3.根据权利要求2所述MDCK-hST3GalIV-04GalTl细胞系的构建方法，其特征在于包括以下具体步骤 1)MDCK细胞的转染及抗性细胞克隆的筛选 转染MDCK细胞密度在6孔板至80% 90%密度时用于转染；将编码hST3GalIV基因序列的真核表达质粒和编码β l-4GalTl基因序列的真核表达质粒各I μ g质粒于100 μ L无血清Opti-MEM培养基中，混匀后添加5 μ L FuGENEeHD转染试剂，充分混匀之后室温孵育15分；将上述复合物覆盖于细胞表面，补加无血清Opti-MEM培养基至总体积为2 mL，置于37°C、5% CO2培养箱中培养24小时后移除培养物，更换为新鲜的含10%胎牛血清的DMEM培养基继续培养； 抗性细胞克隆的筛选转染后36小时后用胰酶消化细胞，按1:10的比例传代至48孔细胞板中，继续...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘秀梵，孙庆，张文俊，王晓泉，胡顺林，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：
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