分泌T-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株制造技术

本发明专利技术提供了一种分泌T-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，还提供了该细胞分泌的T-2毒素单抗。本发明专利技术提供的单抗，其腹水效价比达到1:50000，优于现有的单抗。同时，该单抗与HT-2毒素的交叉反应达到92.8％，与其他多种抗原的交叉反应低于0.1％。包含该单抗的免疫亲和柱-液相色谱法，可以同时高效分离提取出样品中的T-2毒素与HT-2毒素，准确、经济、有效。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种分泌T-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，还涉及该细胞株分泌的T-2毒素单克隆抗体，包含该抗体的免疫吸附剂、免疫亲和柱、试剂盒，以及利用该免疫亲和柱提取纯化T-2毒素和HT-2毒素的方法。
技术介绍
T-2毒素和HT-2毒素是由多种真菌，主要是三线镰刀菌产生的单端孢霉烯族化合物(trichothecenes，TS)，HT-2毒素为T-2毒素的代谢产物。它们广泛分布于自然界，是常见的污染田间作物和库存谷物的主要毒素，对人、畜危害较大。T-2和HT-2毒素主要作用于细胞分裂旺盛的组织器官，如胸腺、骨髓、肝、脾、淋巴结、生殖腺及胃肠粘膜等，抑制这些器官细胞蛋白质和DNA合成。此外，还发现该毒素可引起淋巴细胞中DNA单链的断裂。T-2和HT-2毒素还可作用于氧化磷酸化的多个部位而引起线粒体呼吸抑制。1973年联合国粮农组织(FAQ)和世界卫生组织(WHO)在日内瓦召开的联席会议上，把这类毒素同黄曲霉素一样作为自然存在的最危险的食品污染源。目前，T-2毒素、HT-2毒素的检测方法主要有薄层层析法、酶联免疫法(ELISA)。薄层层析法，要接触大量的标准品，不利于实验者的健康，而且灵敏度很低。酶联免疫法，只适用于定性检测，很容易出现假阳性和假阴性的现象。而免疫亲和层析-液相色谱法是通过免疫亲和层析预处理样品分离提取待检物质，再用液相色谱法检测的方法，其经济、快捷、精确、安全，但是制备得到分离提取待检物质的免疫亲和层析柱却并非易事，最为关键的地方在于寻找同时有效结合T-2毒素、HT-2毒素的抗体。王雄等人(抗T-2毒素单克隆抗体的制备及鉴定，中国卫生检验杂志，2010年2月，20(2)：301-304)报道了一种T-2毒素的单抗。尽管该单抗与黄曲霉素无交叉反应，但是其与HT-2毒素的交叉反应为65.9％。因此，用于免疫亲和层析时，该抗体可以有效提取T-2毒素，但无法有效提取HT-2毒素。同时，该单抗的效价仅为1:12000，与T-2毒素的结合力不强，容易解离，导致最终的检测结果不准确。因此，目前需要一种与其他毒素不发生交叉反应，效价高，并且可以同时有效提取T-2毒素与HT-2毒素的抗体。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.11181的杂交瘤细胞株。本专利技术杂交瘤细胞株，命名为抗T2毒素、HT-2毒素单克隆抗体细胞，于2015年8月21日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC，其地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其保藏号为：CGMCCNO.11181。本专利技术还提供了一种T-2毒素单克隆抗体，该单克隆抗体是由上述的杂交瘤细胞株制备得到的。本专利技术还提供了该免疫吸附剂包括固相载体和抗体，所述抗体包括本专利技术所述的单克隆抗体。优选地，所述抗体还包括下述单克隆抗体中的任一种或多种：由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.5504的杂交瘤细胞株制备得到的单克隆抗体；由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.5505的杂交瘤细胞株制备得到的单克隆抗体；由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.5506的杂交瘤细胞株制备得到的单克隆抗体；由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.9204的杂交瘤细胞株制备得到的单克隆抗体。更优选地，所述抗体包括下述单克隆抗体：由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.5504的杂交瘤细胞株制备得到的单克隆抗体；由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.5505的杂交瘤细胞株制备得到的单克隆抗体；由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.5506的杂交瘤细胞株制备得到的单克隆抗体；由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.9204的杂交瘤细胞株制备得到的单克隆抗体。进一步优选地，所述抗体与固相载体是通过偶联方式结合的。本专利技术还提供了一种装载有上述免疫吸附剂的免疫亲和柱。本专利技术还提供了一种检测T-2毒素和HT-2毒素的试剂盒，它包括前述的单克隆抗体、前述的免疫吸附剂或/和前述的免疫亲和柱。本专利技术还提供了一种提取T-2毒素和HT-2毒素方法，其特征在于：(1)取样品，通过前述的免疫亲和柱；(2)洗涤，洗脱，得洗脱液，即可；所述洗脱中，优选的洗脱剂为甲醇。优选地，所述液体样品是饲料提取液样品。而本专利技术的制备得到的T-2毒素单抗，腹水效价比达到1:50000，相比现有的单抗，具有更高的效价比，与抗原的结合能力强。同时，该单抗与T-2毒素的结合率为100％，与HT-2毒素的结合率达到92.8％，与其他多种抗原的交叉反应低于0.1％。也就是说，本专利技术单抗会特异性结合T-2毒素和HT-2毒素，而不会与其他物质结合。因此，以其制备为免疫吸附剂，可以将T-2毒素和HT-2毒素从样品中准确分离出来。因此，在本专利技术提供的T-2毒素单抗的基础上，本专利技术的免疫亲和层析-液相色谱法可以准确、高效、经济地检测许多商品中的T-2毒素和HT-2毒素。除此之外，在本专利技术的具体实施方案中，以本专利技术的单抗和已知的3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮单抗制备得到的免疫亲和柱，可以结合液相色谱同时准确地检测样品中T-2毒素、HT-2毒素、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮，进一步证明了本专利技术单抗能与T-2毒素、HT-2毒素高效、特异结合，而不会结合其他毒素。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为样品中3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇的色谱图。图2为样品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的色谱图。图3为样品中赭曲霉毒素A的色谱图。图4为样品中玉米赤霉烯酮的色谱图。图5为样品中T-2毒素和HT-2毒素的色谱图。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杂交瘤细胞株，其特征在于：该杂交瘤细胞株是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCC NO.11181的杂交瘤细胞株。

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于：该杂交瘤细胞株是中国微生物菌种保藏管理委
员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.11181的杂交瘤细胞株。
2.一种T-2毒素单克隆抗体，其特征在于：该单克隆抗体是由权利要求1所述的杂
交瘤细胞株制备得到的。
3.一种免疫吸附剂，其特征在于：该免疫吸附剂包括固相载体和抗体，所述抗体包
括权利要求2所述的单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的免疫吸附剂，其特征在于：所述抗体还包括下述单克隆抗
体中的任一种或多种：
由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.
5504的杂交瘤细胞株制备得到的单克隆抗体；
由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.
5505的杂交瘤细胞株制备得到的单克隆抗体；
由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.
5506的杂交瘤细胞株制备得到的单克隆抗体；
由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCCNO.
9204的杂交瘤细胞株制备得到的单克隆抗体。
5.根据权利要求4所述的免疫吸附剂，其特征在于：所述抗体包括下述单克隆抗体：
权利要求2所述的单克隆抗体；
由中国...

【专利技术属性】
技术研发人员：李蓉，王勇，吴振兴，冯雪雅，张静，王雄，果旗，
申请(专利权)人：中山出入境检验检疫局检验检疫技术中心，中华人民共和国中山出入境检验检疫局，山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，北京中检维康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44