植物甾醇酰基转移酰制造技术

本发明专利技术涉及卵磷脂：胆固醇酰基转移酶样多肽（ＬＣＡＴ）和酰基辅酶Ａ：胆固醇酰基转移酶样多肽（ＡＣＡＴ）。本发明专利技术提供了编码这些胆固醇：酰基转移酶样多肽的多核苷酸、由这些多核苷酸编码的多肽、以及这些多核苷酸用于改变植物和宿主细胞中甾醇组成和油产量的用途。本发明专利技术还提供了由包含这些多核苷酸的植物和宿主细胞生成的油，以及包含本发明专利技术植物或油的食品产品、营养补充物、和药用组合物。本发明专利技术的多核苷酸包括由植物来源衍生的多核苷酸。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
相关申请的相互参考本专利技术要求1999年8月30日提交的美国临时申请流水号60/152,493的优先权，并完整收入本文作为参考用于所有目的。背景需要改进由生物合成或天然植物来源获得或处理甾醇组合物的方法。在植物中提高甾醇产量或改变甾醇组成的能力可为用于人和动物营养的甾醇提供新来源。甾醇生物合成由类异戊二烯途径中的法尼二磷酸(farnesyldiphosphate)中间物分支。在哺乳动物和高等植物中，甾醇生物合成是经依赖甲羟戊酸的途径发生的(Goodwin，1981，《类异戊二烯化合物的生物合成》(Biosynthesis of Isoprenoid Compounds)，第1卷，J.W.Porter和S.L.Spurgeon编，第443-480页，John Wiley & Sons，纽约)，而认为在绿藻中甾醇生物合成是经不依赖甲羟戊酸的途径发生的(Schwender等人，1997，《植物脂类的生理学、生物化学、和分子生物学》(Physiology，Biochemistry，and Molecular Biology ofPlant Lipids)，J.P.Williams、M.U.Khan、和N.W.Lem编，第180-182页，Kluwer Academic Publishers，Norwell，MA)。甾醇酯的溶解特征提示这是甾醇的储存形式(Chang等人，1997，生物化学年鉴(Annu.Rev.Biochem.)66613-638)。甾醇O-酰基转移酶，诸如酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶(ACAT)和卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)，催化胆固醇酯的形成，由此对于控制胞内胆固醇储存非常关键。据报导，酵母中LRO1(人LCAT的同源物)和磷脂二酰甘油酰基转移酶的过度表达可提高脂类合成(Oelkers等人，2000，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)2615609-15612；Dahlqvist等人，2000，美国国家科学院进展(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)976487-6492)。多种酰基转移酶蛋白质的鉴定对于进一步研究植物甾醇合成系统和开发新的和/或候选甾醇来源是有用的。植物机制的研究可提供用于进一步增强、控制、修饰、或改变植物细胞甾醇组成的方法。此外，甾醇含量和/或组成的这种改变可为获得针对压力和昆虫损害的耐受性提供方法。特别感兴趣的是编码可用于遗传工程应用的蛋白质的基因核酸序列。专利技术概述本专利技术涉及卵磷脂胆固醇酰基转移酶样多肽(Lecithincholesterol acyltransferase-like polypeptide，本文也称为LCAT)和酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶样多肽(acyl CoAcholesterol acyltransferase-like polypeptide，本文也称为ACAT)。具体而言，本专利技术涉及编码这些甾醇酰基转移酶的多核苷酸、由这些多核苷酸编码的多肽、以及这些多核苷酸用于改变甾醇组成和油产量的用途。本专利技术的多核苷酸包括由植物来源衍生的多核苷酸。因此，本专利技术的一个方面提供了编码植物卵磷脂胆固醇酰基转移酶样多肽或其片段、植物酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶样多肽或其片段的分离核酸序列。另一方面提供了基本上由SEQ ID NO2、4、6、8、10-29、43-51、73、或75组成的分离核酸序列。还提供了由SEQ ID NO2、4、6、8、10-29、43-51、73、或75组成的分离核酸序列。另一方面提供了包含选自下组的多核苷酸的分离核酸序列编码SEQ ID NO3的多肽或含至少一个保守氨基酸替代的SEQ ID NO3的分离多核苷酸；SEQ ID NO2；与SEQ ID NO2具有至少70％、80％、90％、或95％序列同一性的分离多核苷酸；在严谨条件下与SEQ ID NO2发生杂交的至少10个氨基酸的分离多核苷酸；与任何上述多核苷酸互补的分离多核苷酸；和在严谨条件下与SEQ ID NO2发生杂交且编码植物卵磷脂胆固醇酰基转移酶样多肽的分离多核苷酸。另一方面提供了基本上由多核苷酸通式5’X-(R1)n-(R2)n-(R3)n-Y 3’组成的分离核酸序列，其中X是氢，Y是氢或金属，R1和R2是任意核酸，n是0-3000之间的整数，R2选自编码SEQ ID NO3的多肽或含至少一个保守氨基酸替代的SEQ ID NO3的分离多核苷酸；SEQ ID NO2；与SEQ ID NO2具有至少70％、80％、90％、或95％序列同一性的分离多核苷酸；在严谨条件下与SEQ ID NO2发生杂交的至少10个氨基酸的分离多核苷酸；与任何上述多核苷酸互补的分离多核苷酸；和在严谨条件下与SEQ ID NO2发生杂交且编码植物卵磷脂胆固醇酰基转移酶样多肽的分离多核苷酸。另一方面提供了包含选自下组的多核苷酸的分离核酸序列编码SEQ ID NO5的多肽或含至少一个保守氨基酸替代的SEQ ID NO5的分离多核苷酸；SEQ ID NO4；与SEQ ID NO4具有至少70％、80％、90％、或95％序列同一性的分离多核苷酸；在严谨条件下与SEQ ID NO4发生杂交的至少10个氨基酸的分离多核苷酸；与任何上述多核苷酸互补的分离多核苷酸；和在严谨条件下与SEQ ID NO4发生杂交且编码植物卵磷脂胆固醇酰基转移酶样多肽的分离多核苷酸。另一方面提供了基本上由多核苷酸通式5’X-(R1)n-(R2)n-(R3)n-Y 3’组成的分离核酸序列，其中X是氢，Y是氢或金属，R1和R2是任意核酸，n是0-3000之间的整数，R2选自编码SEQ ID NO5的多肽或含至少一个保守氨基酸替代的SEQ ID NO5的分离多核苷酸；SEQ ID NO4；与SEQ ID NO4具有至少70％、80％、90％、或95％序列同一性的分离多核苷酸；在严谨条件下与SEQ ID NO4发生杂交的至少10个氨基酸的分离多核苷酸；与任何上述多核苷酸互补的分离多核苷酸；和在严谨条件下与SEQ ID NO4发生杂交且编码植物卵磷脂胆固醇酰基转移酶样多肽的分离多核苷酸。另一方面提供了包含选自下组的多核苷酸的分离核酸序列编码SEQ ID NO7的多肽或含至少一个保守氨基酸替代的SEQ ID NO7的分离多核苷酸；SEQ ID NO6；与SEQ ID NO6具有至少70％、80％、90％、或95％序列同一性的分离多核苷酸；在严谨条件下与SEQ ID NO6发生杂交的至少10个氨基酸的分离多核苷酸；与任何上述多核苷酸互补的分离多核苷酸；和在严谨条件下与SEQ ID NO6发生杂交且编码植物卵磷脂胆固醇酰基转移酶样多肽的分离多核苷酸。另一方面提供了基本上由多核苷酸通式5’X-(R1)n-(R2)n-(R3)n-Y 3’组成的分离核酸序列，其中X是氢，Y是氢或金属，R1和R2是任意核酸，n是0-3000之间的整数，R2选自编码SEQ ID NO7的多肽或含至少一个保守氨基酸替代的SEQ ID NO7的分离多核苷酸；SEQ ID NO6；与SEQ ID NO6具有至少70％、80％、90％、或95％序列同一性的分离多核苷酸；在严谨条件下与SEQ ID NO6发生杂交的至少10个氨基酸的分离多核苷酸；本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含编码植物卵磷脂：胆固醇酰基转移酶样多肽或其片段的多核苷酸的分离核酸序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：M拉斯纳，A范伊尼纳姆，
申请(专利权)人：孟山都技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]