一种海洋菌株催化不对称还原制备手性苯丙氨酸的方法技术

一种海洋菌株催化不对称还原制备手性苯丙氨酸的方法，涉及手性苯丙氨酸。将菌种接入2216L培养基中培养，得发酵液，离心获得细胞，用缓冲液重悬、洗涤，配制成细胞液；所述菌种为南海芽孢杆菌(Bacillus nanhaiensis)DSF-15A2，保藏中心登记入册编号为CGMCC No.8969；在细胞液中，加入苯丙酮酸和氨基供体作为底物，再加入辅助底物用于辅酶循环再生，反应后得到含有产物L-苯丙氨酸的反应液，离心去除沉淀，上清液加入等量的甲醇，震荡混合均匀，离心去除沉淀，上清液稀释后进行测定，苯丙酮酸的浓度用高效液相色谱检测，产物L-苯丙氨酸的浓度和对映体过量值用高效液相色谱测定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及手性苯丙氨酸(L-苯丙氨酸)，尤其是涉及一种海洋菌株催化不对称还原制备手性苯丙氨酸的方法。
技术介绍
手性氨基酸(天然L-氨基酸和非天然D-氨基酸)是合成手性药物、手性农药和手性食品添加剂等精细化工品的关键中间体。许多新药(如蛋白酶抑制剂类、抗艾滋病药等)的制备需要使用人工合成的非天然手性氨基酸。而众多手性氨基酸的合成离不开氧化还原酶的催化，因此寻找高选择性的氧化还原酶成为手性氨基酸研究的热点。苯丙氨酸主要用作试剂及医药上的胃肠外营养输液，亦见用作特殊人员合成膳食、必需氨基酸片等营养强化剂的成分。L-苯丙氨酸是合成一些抗癌药物的中间体和良好载体，通过L-苯丙氨酸可以把抗肿瘤药物载入肿瘤所在的部位，不但可以抑制肿瘤生长，而且又可降低肿瘤药物的毒性。随着甜味剂二肽阿斯巴甜(APM)投放市场，L-苯丙氨酸作为它的主要原料，需求量急剧增加(GerigkMR，MaassD，KreutzerA，etal.Enhancedpilot-scalefed-batch>L-phenyla本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海洋菌株催化不对称还原制备手性苯丙氨酸的方法，其特征在于包括以下步骤：1)细胞液制备：将菌种接入2216L培养基中培养，得发酵液，离心获得细胞，用缓冲液重悬、洗涤，配制成细胞液；所述菌种为南海芽孢杆菌(Bacillus nanhaiensis)DSF‑15A2，所述南海芽孢杆菌(Bacillus nanhaiensis)DSF‑15A2已于2014年03月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为CGMCC No.8969；2)全细胞催化反应：在步骤1)得到的细胞液中，加入苯丙酮酸和氨基供体作为底物，再加入辅助底物用于辅酶循环再生，反应后得到含有产物L‑...

【技术特征摘要】
1.一种海洋菌株催化不对称还原制备手性苯丙氨酸的方法，其特征在于包括以下步骤：
1)细胞液制备：将菌种接入2216L培养基中培养，得发酵液，离心获得细胞，用缓冲液
重悬、洗涤，配制成细胞液；所述菌种为南海芽孢杆菌(Bacillusnanhaiensis)DSF-15A2，所
述南海芽孢杆菌(Bacillusnanhaiensis)DSF-15A2已于2014年03月25日保藏于中国微生物菌
种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为CGMCCNo.8969；
2)全细胞催化反应：在步骤1)得到的细胞液中，加入苯丙酮酸和氨基供体作为底物，
再加入辅助底物用于辅酶循环再生，反应后得到含有产物L-苯丙氨酸的反应液；
3)分离与检测：将步骤2)得到的含有产物L-苯丙氨酸的反应液离心去除沉淀，上清液
加入等量的甲醇，震荡混合均匀，离心去除沉淀，上清液稀释后进行测定，苯丙酮酸的浓度
用高效液相色谱检测，产物L-苯丙氨酸的浓度和对映体过量值用高效液相色谱测定，所述沉
淀为蛋白质。
2.如权利要求1所述一种海洋菌株催化不对称还原制备手性苯丙氨酸的方法，其特征在
于在步骤1)中，所述菌种接入的量按质量百分比为2216L培养基的1％；所述2216L培养基
的组成可为：1～15.0g/L蛋白胨，1～10.0g/L酵母粉，0.1～1g/L牛肉膏，0.1～2g/L柠
檬酸钠，0.1～1g/LNH4NO3，0.1～2g/L乙酸钠，用海水配制至1L。
3.如权利要求1所述一种海洋菌株催化不对称还原制备手性苯丙氨酸的方法，其特征在
于在步骤1)中，所述培养的条件为：起始pH6.5～8.0，装液量体积分数为5％～15％，培养
温度20～40℃，摇床转速150～250rpm，培养时间12...

【专利技术属性】
技术研发人员：方柏山，任红，王世珍，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35