一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂盒及制备方法技术

本发明专利技术提供一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂盒，包括：分别存放在四个容器中的试剂A、试剂B、试剂C和试剂D，其中，试剂A：0.01～0.5mol/L的无机酸水溶液；试剂B：0.01～0.5mol/L的亚硝酸钠水溶液；试剂C：苯胺衍生物的无机酸水溶液，苯胺衍生物的浓度为0.005～0.1mol/L，无机酸的浓度为0.01～0.5mol/L，所述苯胺衍生物中的苯环上至少含有磺酸基、硝基、氰基或氟基；试剂D：N-1-萘基乙二胺二盐酸盐的水溶液，所述N-1-萘基乙二胺二盐酸盐的浓度为0.01～0.3mol/L；其中，所述试剂C中苯胺衍生物的浓度不高于试剂A中无机酸的浓度和试剂B中亚硝酸钠的浓度，所述无机酸选自盐酸、硫酸、四氟硼酸或六氟磷酸。本发明专利技术同时提供上述试剂盒的制备方法。本发明专利技术的检测试剂盒具有较好的稳定性、可靠性和广谱性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种临床诊断用的体外检测试剂盒，具体地说，涉及一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂盒及制备方法。
技术介绍
癌症死亡率在所有疾病中占据首位，是人类健康的第一杀手已成为威胁人类生命和健康的一大病因，据统计每隔25年，癌症患者的人数就要翻一番。不仅如此，癌症的死亡人数也在全球迅猛上升，2030年这个数字可能会增至1320万。早期发现是治疗肿瘤的关键，肿瘤的发展分为五个阶段：良性、肿瘤细胞启动期、肿瘤早期、肿瘤中期、晚期。癌症的可怕之处，就在于前三个阶段，影像学根本无法检测出来，即便到了肿瘤中期，也只有非常专业的医生用较先进的设备才能测出。世界卫生组织的研究认为：目前1/3的癌症是可以预防的；1/3的癌症可以通过积极治疗而延长患者生命；1/3的癌症是可以通过早期发现、早期诊断、早期治疗而痊愈的。癌细胞的核苷酸代谢异常会生成一种单羟酚类代谢物，具体是指酪氨酸(对羟基苯丙氨酸)、色氨酸和5-羟吲哚乙酸，且含量远高于正常人，而这种物质能够通过尿液排放。检测单羟酚类代谢物的含量，可以推断人体是否患有癌症，能够及早的发现肿瘤，挽救生命，无需额外的开支，免去病人的恐惧和痛苦。中国专利CN1192532A公开了一种肿瘤病尿样检测试剂，由分别存放的A、B、C、D四个试剂组成，试剂A是含硫酸汞0.5～15％的硫酸溶解液，试剂B为含亚硝酸0.001～1％的无机酸或水溶解液，试剂C为含对氨基苯磺酸0.01～0.5％的水或有机酸溶解液；试剂D是含萘胺衍生物0.05～10％无机酸或有机酸溶解液。CN1192532A公开的方案通过反应中显示的颜色变化检测尿样中单羟酚的含量，该检测方法有一定的效果，但也存在一定的缺陷。例如，首先，尿液中的单羟酚先与试剂A中的汞盐反应生成络合物，而该络合物由于单羟酚中羟基将其孤对电子供给到金属离子的空轨道上，而导致羟基对芳环的供电子能力下降，并且络合后的结构使芳环上的电子云密度降低，最终导致接下来的重氮化反应活性不足，最终导致检测不准确；此外，试剂B中的亚硝酸在存贮和运输过程中容易发生分解，导致无法和试剂C反应生成重氮盐，影响检测的准确性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术中存在的缺陷和不足，提供一种新的对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂盒，具有稳定性高和灵敏度高的优点，能够应用于大规模肿瘤代谢异常等的筛查。为达到上述目的，本专利技术提供一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂盒，包括：分别存放在四个容器中的试剂A、试剂B、试剂C和试剂D，其中，试剂A：0.01～0.5mol/L的无机酸水溶液；试剂B：0.01～0.5mol/L的亚硝酸钠水溶液；试剂C：苯胺衍生物的无机酸水溶液，苯胺衍生物的浓度为0.005～0.1mol/L，无机酸的浓度为0.01～0.5mol/L，所述苯胺衍生物中的苯环上至少含有磺酸基、硝基、氰基或氟基；试剂D：N-1-萘基乙二胺二盐酸盐的水溶液，所述N-1-萘基乙二胺二盐酸盐的浓度为0.01～0.3mol/L；其中，所述试剂C中苯胺衍生物的浓度不高于试剂A中无机酸的浓度和试剂B中亚硝酸钠的浓度，所述无机酸选自盐酸、硫酸、四氟硼酸或六氟磷酸。优选地，所述试剂C中苯胺衍生物选自对氨基苯磺酸、邻氨基苯磺酸、对硝基苯胺、对氨基苯腈、邻氨基苯腈、对氟苯胺、邻氟苯胺、2-氟-4-硝基苯胺、2-氯-4-硝基苯胺、2-甲基-4-硝基苯胺、2-甲基-4-氟苯胺、4-甲基-2-氟苯胺、2,6-二甲基-4-硝基苯胺或2,4-二甲基-6-硝基苯胺。本专利技术同时提供一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：配制试剂A：将无机酸加入水中得到浓度为0.01～0.5mol/L的无机酸水溶液；配制试剂B：将亚硝酸钠加入水中得到浓度为0.01～0.5mol/L的亚硝酸钠水溶液；配制试剂C：将苯胺衍生物和无机酸加入水中得到苯胺衍生物的无机酸水溶液，所述苯胺衍生物中的苯环上至少含有硝基、氰基或氟基，所述试剂C中苯胺衍生物的浓度为0.005～0.1mol/L，无机酸的浓度为0.01～0.5mol/L；配制试剂D：将N-1-萘基乙二胺二盐酸盐加入水中，得到N-1-萘基乙二胺二盐酸盐的水溶液，所述N-1-萘基乙二胺二盐酸盐的浓度为0.01～0.3mol/L；其中，所述试剂C中苯胺衍生物的浓度不高于试剂A中无机酸的浓度和试剂B中亚硝酸钠的浓度，所述无机酸选自盐酸、硫酸、四氟硼酸或六氟磷酸。优选地，所述试剂C中苯胺衍生物选自对氨基苯磺酸、邻氨基苯磺酸、对硝基苯胺、对氨基苯腈、邻氨基苯腈、对氟苯胺、邻氟苯胺、2-氟-4-硝基苯胺、2-氯-4-硝基苯胺、2-甲基-4-硝基苯胺、2-甲基-4-氟苯胺、4-甲基-2-氟苯胺、2,6-二甲基-4-硝基苯胺或2,4-二甲基-6-硝基苯胺。本专利技术的理论基础在于：尿液是人体不断产生、不断排泄的代谢产物，当体内肿瘤因子活动时，体内相对部分的分子量为4000～6000的蛋白代谢异常使尿液中的硫脲、硫乙醇胺、酪氨酸、色氨酸等多种有机物含量与含毒激素明显增加，而健康人的尿液中单羟酚含量极少，通过检测尿液中诸如对羟基苯丙氨酸等单羟酚的含量，来判定被测试者体内是否有相关的细胞异常代谢，以此作为细胞内代谢异常类疾病筛查的辅助诊断指标。具体地说，向待测尿液中加入试剂A、试剂B，充分震荡后，加入试剂C，得到混合液M，充分震荡。酸性条件下，试剂A、试剂B和试剂C反应生成重氮盐，并与尿液中的对羟基苯丙氨酸反应生成偶氮化合物。由于偶氮基是一个发色基，芳香偶氮化合物一般都具有颜色，并且该颜色与底物颜色相比变化非常明显。若上述试剂混合后产生颜色反应，则表明尿液中含有对羟基苯丙氨酸。进一步将试剂D加入上述混合液中，若尿液中含有对羟基苯丙氨酸，由于与尿液中对羟基苯丙氨酸相比，试剂C中的苯胺衍生物是不足量的，则试剂C中的苯胺衍生物被消耗掉，加入试剂D后，试剂D中的N-1-萘基乙二胺二盐酸盐无法与试剂C中的苯胺衍生物反应生成具有紫红色的物质，则表明混合液M中的苯胺衍生物被消耗掉，进一步表明尿液中含有对羟基苯丙氨酸。若尿液中对羟基苯丙氨酸含量极少，则混合液M中苯胺衍生物没有被消耗掉，混合液M震荡后颜色基本无变化。加入试剂D后，混合液M中苯胺衍生物与N-1-萘基乙二胺二盐酸盐反应生成具有紫红色的偶氮化合物，表明尿液中基本没有对羟基苯丙氨酸。与现有技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂盒，其特征在于，包括：分别存放在四个容器中的试剂A、试剂B、试剂C和试剂D，其中，试剂A：0.01～0.5mol/L的无机酸水溶液；试剂B：0.01～0.5mol/L的亚硝酸钠水溶液；试剂C：苯胺衍生物的无机酸水溶液，苯胺衍生物的浓度为0.005～0.1mol/L，无机酸的浓度为0.01～0.5mol/L，所述苯胺衍生物中的苯环上至少含有磺酸基、硝基、氰基或氟基；试剂D：N‑1‑萘基乙二胺二盐酸盐的水溶液，所述N‑1‑萘基乙二胺二盐酸盐的浓度为0.01～0.3mol/L；其中，所述试剂C中苯胺衍生物的浓度不高于试剂A中无机酸的浓度和试剂B中亚硝酸钠的浓度，所述无机酸选自盐酸、硫酸、四氟硼酸或六氟磷酸。

【技术特征摘要】
1.一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂盒，其特征在于，包括：分别存
放在四个容器中的试剂A、试剂B、试剂C和试剂D，其中，
试剂A：0.01～0.5mol/L的无机酸水溶液；
试剂B：0.01～0.5mol/L的亚硝酸钠水溶液；
试剂C：苯胺衍生物的无机酸水溶液，苯胺衍生物的浓度为
0.005～0.1mol/L，无机酸的浓度为0.01～0.5mol/L，所述苯胺衍生物中的苯环
上至少含有磺酸基、硝基、氰基或氟基；
试剂D：N-1-萘基乙二胺二盐酸盐的水溶液，所述N-1-萘基乙二胺二盐
酸盐的浓度为0.01～0.3mol/L；
其中，所述试剂C中苯胺衍生物的浓度不高于试剂A中无机酸的浓度和
试剂B中亚硝酸钠的浓度，所述无机酸选自盐酸、硫酸、四氟硼酸或六氟磷
酸。
2.根据权利要求1所述的对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂盒，其特征在
于，所述试剂C中苯胺衍生物选自对氨基苯磺酸、邻氨基苯磺酸、对硝基苯
胺、对氨基苯腈、邻氨基苯腈、对氟苯胺、邻氟苯胺、2-氟-4-硝基苯胺、2-
氯-4-硝基苯胺、2-甲基-4-硝基苯胺、2-甲基-4-氟苯胺、4-甲基-2-氟苯胺、2,6-
二甲基-4-硝基苯胺或2,4-二甲基-6-硝基苯胺。
3.一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张凤华，
申请(专利权)人：张凤华，
类型：发明
国别省市：吉林;22